Invitrogen™ GeneArt™ Kit de clonage et d’assemblage sans couture

Le GeneArt™ kit de clonage et d’assemblage sans couture permet le clonage simultané et directionnel de 1 à 4 fragments PCR, constitués de n’importe quelle séquence, dans n’importe quel vecteur linéarisé, lors d’une seule réaction à température ambiante de 30 minutes. Le kit contient tout ce qui est nécessaire à l’assemblage des fragments d’ADN et à leur transformation en E. coli pour la sélection et la croissance des vecteurs recombinants.

• Vitesse et facilité — Clonez jusqu’à 4 fragments d’ADN, avec la séquence de votre choix, simultanément dans un seul vecteur (jusqu’à 13 Kob); aucune restriction de digestion, de ligature ou de sites de recombinaison requis
• Précision et efficacité —Conçue pour vous permettre de cloner ce que vous voulez, où vous voulez, dans l’orientation souhaitée, et atteindre jusqu’à 90% de clones corrects sans aucune séquence supplémentaire
• Flexibilité — vectorielle Utilisez notre vecteur linéaire ou un vecteur de votre choix
• Outils — gratuits Design DNA oligos et plus encore grâce à notre interface web gratuite qui vous guide étape par étape dans votre projet
• Applications — diverses Simplifier de nombreuses techniques de biologie synthétique et moléculaire grâce à la combinaison, l’addition, la suppression ou l’échange rapide de segments d’ADN

Pour le clonage de plus de 4 fragments d’ADN, des molécules finales supérieures à 110 Kb, ou pour l’utilisation d’éléments d’ADN préexistants trop longs pour être amplifiés par PCR; veuillez considérer le système d’assemblage GeneArt™ génétique de haut ordre (cat# A13285).

Création
GeneArt™ de clones simple et rapide Le clonage sans couture est un processus simple en deux étapes, consistant en une réaction d’assemblage en tube suivie d’une transformation en E. coli chimiquement Shot™ compétent TOP10. Le kit utilise les propriétés d’un mélange enzymatique propriétaire pour assembler des fragments d’ADN avec une homologie terminale partagée sans laisser de séquences ou de cicatrices supplémentaires (sans couture). Une partie de la réaction d’assemblage est ensuite transformée en cellules compétentes TOP10 fournies, produisant des clones prêts à être analysés le lendemain. L’homologie finale requise de 15 paires de bases peut être facilement réalisée par amplification PCR avec des oligos d’ADN personnalisés.

Efficacité, flexibilité et précision
du clonageAvec le GeneArt™ kit de clonage et d’assemblage sans couture, les principaux facteurs influençant l’efficacité du clonage sont la taille des éléments d’ADN (100 pb à 5 Ko), la taille totale de la molécule finale (≤ 13 Ko), ainsi que la qualité et la spécificité du fragment. L’extrémité terminale des fragments de PCR (surplombs en A ou émoussés) n’affecte pas l’efficacité du clonage.

Les efficacités typiques de clonage pour différents nombres de fragments clonés en pUC19L sont les suivantes :

• 90% pour un seul élément ADN de 5 Ko
• 70% pour 4 fragments de 1 Ko chacun
• 40% pour 4 fragments d’ADN de 2 Kb chacun

Le succès du clonage est indépendant de la séquence d’insertion et du type de vecteur, ce qui vous permet de concevoir et d’ajouter presque n’importe quelle séquence désirée, ou combinaison de séquences, à n’importe quel plasmide, tant qu’il peut être linéarisé soit par digestion enzymatique de restriction, soit par PCR. Les clones circularisés obtenus de la réaction ne contiennent que la séquence de votre vecteur original, des inserts et des homologies désignées, sans insertion nucléotidique superflue.

Soutien
à la conception du clonage in silico Une étape clé du GeneArt™ clonage sans couture est la conception correcte des fragments et oligos avec l’homologie et l’espacement appropriés pour aider à assurer un assemblage réussi de votre clone. Pour simplifier et accélérer le processus de conception, nous offrons un outil en ligne gratuit pour vous aider à concevoir votre expérience in silico. L’outil vérifie la compatibilité de la conception expérimentale avec les spécifications du produit, conçoit des oligos d’ADN avec homologie finale pour l’amplification PCR des différents éléments à cloner, et présente à l’utilisateur une représentation graphique du vecteur, ainsi qu’une séquence annotée téléchargeable au GenBank format compatible avec le logiciel Vector NTI™ .

Applications
Le GeneArt™ kit de clonage et d’assemblage sans couture est conçu pour permettre les expériences de clonage et d’assemblage de l’ADN dans un large éventail d’applications en biologie moléculaire et en biologie synthétique, entre autres. Le produit permet la création de vecteurs d’expression modulaires, avec des pièces interchangeables, et peut être utilisé pour effectuer une variété de tâches qui impliqueraient autrement plusieurs étapes. Utilisez le kit pour simplifier : construire des protéines de fusion, supprimer, remplacer ou ajouter des éléments d’ADN tels que des sites de restriction dans un vecteur existant, et de nombreuses autres techniques nécessitant la manipulation de séquences génétiques.

Pour la recherche seulement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.