Thermo Scientific™ Uracile-ADN glycosylase, labile thermiquement

L’ADN contenant de la dU double et simple brin sont des substrats pour la glycosylase de l’uracile-ADN, tandis que l’ARN et l’ADN normal contenant de la dT ne le sont pas.

La glycosylase uracile-ADN peut aussi être utilisée pour augmenter l’efficacité du clonage des produits PCR contenant des amorces contenant du dU intégrées, ainsi que pour accroître l’efficacité de la mutagenèse orientée sur le site.

La glycosylase de l’ADN uracile dérivée de Gadus morhua possède tous les attributs de l’enzyme dérivée d’E. coli , avec l’avantage supplémentaire d’être labile à la chaleur. Il est complètement et irréversiblement inactivé après une incubation de 10 minutes à 50 °C.

Pureté :

L’enzyme est purifiée chromatographiquement et testée pour détecter des endonucléases et exonucléases contaminantes.

Tampon de stockage :

50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,1 Triton X-100 %, 50% de glycérol.

Conditions du test :

Le mélange réactionnel contient 70 mM de Tris-HCl, pH 8,0, 10 mM de NaCl, 1 mM d’EDTA, 100 μg/mL de BSA, ³ADN marqué H-dUTP et de la glycosylase d’Uracil-ADN. L’incubation est à 37 °C pendant 1 heure.

Définition de l’unité :

Une unité est la quantité d’enzyme nécessaire pour libérer 1 nmol d’uracile de l’ADN contenant du dU en une heure à 37 °C.

Concentration :

1 unité/μL

Applications :

1. Étude de la réparation de l’ADN et de la détection de mutations.
2. Augmenter l’efficacité du clonage des produits PCR.
3. Augmenter l’efficacité de la mutagenèse dirigée par le site.
4. Étude des interactions protéine-ADN.

Source :

Recombinant à partir de Gadus morhua (foie de morue)