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Thermo Scientific™ T4 ADN Ligase (5 U/μL)

Numéro de catalogue. FEREL0014
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Numéro de catalogue. FEREL0014 Fournisseur Thermo Scientific™ Code fournisseur EL0014

Description

T4 La ligase de l'ADN catalyse la formation d'une liaison phosphodiester entre les terminaisons juxtaposées du phosphate 5'-phosphate et du 3'-hydroxyle dans l'ADN ou l'ARN duplex.

Catalyser la formation d'une liaison phosphodiester entre les extrémités juxtaposées du phosphate 5'-phosphate et du 3'-hydroxyle dans l'ADN ou l'ARN duplex avec la ligase de l' Thermo Scientific™ T4 ADN. L’enzyme répare les entaille monobrin dans l’ADN duplex, l’ARN ou les hybrides ADN/ARN. Il relie aussi des fragments d’ADN avec des terminus cohésifs ou émoussés, mais n’a aucune activité sur les acides nucléiques simple brin.

L’ADN T4 que la ligase nécessite ATP comme cofacteur.

Faits saillants

  • Actif dans l’enzyme de restriction Themo Scientific, la PCR et les tampons RT (lorsqu’ils sont complétés par ATP)
  • La – ligature rapide à extrémité collante se termine en 10 minutes à température ambiante
  • Fourni avec la solution PEG pour une ligation à extrémité émoussée efficace

Applications

  • Clonage de fragments d’ADN générés par une enzyme de restriction
  • Clonage de produits PCR
  • Assemblage de lieurs ou adaptateurs d’oligonucléotides double brin à l’ADN
  • Mutagenèse dirigée par le site
  • Polymorphisme de longueur de fragment amplifiée (AFLP)
  • Détection d’ARN médiée par ligase (voir Référence 3)
  • Réparation de l’entaille dans des hybrides ADN, ARN ou ADN/ARN duplex
  • Auto-circularisation de l’ADN linéaire.

Remarques

  • La liaison de la ligase d’ADN T4 à l’ADN peut entraîner un décalage de bande dans les gels d’agarose. Pour éviter cela, incubez des échantillons avec une solution SDS 6X de colorant & de charge ADN à 70 °C pendant 5 minutes ou 65 °C pendant 10 minutes, puis laissez-les refroidir sur la glace avant l’électrophorèse.
  • Le volume du mélange de la réaction de ligature ne doit pas dépasser 10% du volume cellulaire compétent lors du processus de transformation.
  • Avant l’électro-transformation, retirez T4 la ligase d’ADN du mélange de ligature par extraction de colonne de spin ou chloroforme. L’ADN extrait peut être encore précipité avec de l’éthanol.

Spécifications

Concentration 5 U/μL
Enzyme ADN Ligase
Tampon compatible Tampon de ligase ADN 10X T4
Quantité 200 unités
Type de produit T4 ADN Ligase

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.