Invitrogen™ SuperScript™ Kit de préampli cADN à cellule unique IV / faible entrée

Le Invitrogen SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit est conçu pour une synthèse et une amplification efficaces de l’ADNc directement à partir de cellules uniques intactes (1 –1 000) ou de faibles quantités d’ARN total (2 pg –10 ng). Il contient tous les composants nécessaires pour effectuer la lyse cellulaire, la transcription inverse (RT) et l’amplification par PCR dans un format prémélangé pratique. Une combinaison d’enzymes supérieures (SuperScript IV Reverse Transcriptase et Platinum SuperFi U DNA Polymerase) permet des rendements, une sensibilité et une précision élevés. En raison des temps de réaction courts et du temps minimal d’intervention pratique, ce protocole simple de préamplification à un tube peut être complété en un peu plus de deux heures. L’ADNc global de haute qualité obtenu peut être utilisé pour des applications de séquençage de nouvelle génération (NGS) ou pour l’analyse de l’expression génique par PCR en temps réel.

Les caractéristiques du kit SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp incluent :
• Sensibilité supérieure pour la détection facile de cibles à faible abondance (aussi faibles qu’une seule cellule ou 2 pg ARN total)
• ADNc de haute qualité pour des informations de transcrits de longueur complète avec couverture
• uniforme Flux de travail simplifié avec protocole •
simple à un tube Temps courts de lyse et transcription inversée pour gagner
• du temps Préamplification globale compatible avec l’analyse en aval par NGS ou la PCR

en temps réel Le kit de préamplification cDNA à cellule simple/faible entrée SuperScript IV exploite l’activité terminale de la transférase désoxynucléotyl (TdT) du SuperScript IV Revers Transcriptase. La capture de séquences contenant des oligonucléotides contenant des oligo(dT) et des adaptateurs sert d’amorce pour la synthèse sélective de l’ADN du premier brin à partir d’ARN contenant du poly(A). Lorsque la transcriptase inverse atteint l’extrémité 5 ‘ du gabarit d’ARN, TdT l’activité ajoute 13 –nucléotides supplémentaires à l’extrémité de l’ADNc, permettant la commutation du gabarit et l’incorporation sans ligature de la séquence adaptatrice à l’extrémité 3 ‘ de l’ADNc résultant. La grande sensibilité et l’efficacité de commutation de gabarit de SuperScript IV Reverse Transcriptase permettent la capture même de cibles à faible abondance.

Les séquences adaptatrices intégrées aux deux extrémités de l’ADNc servent de sites de liaison d’amorce lors de l’étape suivante d’amplification PCR, permettant la préamplification globale des modèles de longueur complète. Le Master Mix de préamplification Platinum SuperFi U inclus contient une ADN polymérase de haute fidélité supérieure qui assure une amplification efficace des longs modèles (jusqu’à 10 ko) sans biais ni erreur induits par PCR.