Invitrogen™ SuperScript™ Système de synthèse de premier brin IV

Le système de synthèse SuperScript IV est considérablement amélioré par rapport au système basé sur SuperScript III en termes de résistance aux inhibiteurs, de processivité et de vitesse de réaction, tout en conservant tous les avantages du système précédent, notamment une thermostabilité accrue, une synthèse d’ADNc pleine longueur hautement efficace et une activité RNase réduite. Le système SuperScript IV est conçu pour fournir une synthèse d'ADNc fiable, cohérente et rapide en présence d'inhibiteurs présents dans une grande variété d'échantillons qui rendent inefficaces les autres RT actuellement disponibles.

L’étape extrêmement simplifiée d'élimination de l'ADN génomique du système de synthèse du premier brin SuperScript IV avec ezDNase réduit considérablement la durée de l'ensemble du protocole de transcription inverse et diminue les variations possibles de l’expression génique dues à la perte ou à l’endommagement de l’ARN lors du traitement conventionnel à la DNase. Le système de synthèse SuperScript IV avec ezDNase est le choix idéal en termes de performances et de flexibilité pour les applications RT-PCR.  Nous le recommandons pour toutes les applications RT-PCR, en particulier lorsque la reproductibilité et la fiabilité sont primordiales et lorsque des inhibiteurs présents dans l'échantillon d'ARN peuvent interférer avec la synthèse d'ADNc, entraînant des biais dans les études d'expression génique.

Les deux systèmes de synthèse SuperScript IV First-Strand contiennent tous les composants nécessaires aux réactions RT, ainsi qu’un gène de contrôle et des amorces supplémentaires, et offrent la flexibilité nécessaire pour personnaliser la configuration RT en fonction des besoins de votre application..

Les caractéristiques du système de synthèse du premier brin SuperScript IV comprennent :
• Résistance nettement améliorée à divers inhibiteurs pouvant interférer avec la synthèse de l’ADNc
• Synthèse d’ADNc solide et spécifique dans un large éventail de types d’échantillons
• Une réaction plus rapide de la transcription inverse qui réduit le temps d’incubation de >50 à 10 minutes
• Processus significativement supérieur par rapport au SuperScript III RT
• Étape de retrait simplifié de l’ADN génomique (système de synthèse SuperScript IV avec ezDNase seulement)

Source d’enzymes
Purifié à partir de E. coli exprimant le gène pol de M-MLV, modifié pour augmenter la thermostabilité, la demi-vie, la processus et la résistance aux inhibiteurs et pour réduire l’activité de la RNase H.

Tests de performance et de qualité
Dosages de l’endodésoxyribonucléase, de l’exodésoxyribonucléase et de la ribonucléase; et le rendement et la longueur du produit ADNc

Définition de l’unité
Une unité de SuperScript IV RT correspond à la quantité d’enzyme nécessaire pour incorporation de 1 nmole de désoxyribonucléotide dans le matériel précipitable à l’acide en 10 minutes à 37° C à l’aide d’oligo(dT) de poly(A)_{12 à 18} comme matrice/amorce.

Conditions de réaction unitaire
Tris-HCl 50 mM (pH 8,3), MgCI 4 mM₂, DTT 10 mM, KCI 50 mM, dTTP 0,5 mM, 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP, 0,4 mM d’oligo poly(A) (dT)_{12 à 18} et une enzyme dans 20μ L pendant 10 minutes à 37°C