Invitrogen™ SuperScript™ III SuperMix de synthèse première brin pour qRT-PCR

SuperScript III First-Brand Synthesis SuperMix pour qRT-PCR offre la capacité haute température de SuperScript III Reverse Transcriptase dans un format SuperMix optimisé pour la synthèse de l’ADNc de première brin destinée à une utilisation en RT-PCR quantitative en temps réel (qRT-PCR). Le système simple de réaction qui fait gagner du temps utilise seulement deux tubes : un mélange de réaction 2X et un mélange enzymatique.

Mélange
enzymatiqueSuperScript III Revers Transcriptase, inclus dans le mélange enzymatique RT, est une version de M-MLV RT conçue pour réduire l’activité RNase H et offrir une stabilité thermique accrue. L’enzyme peut être utilisée pour synthétiser de l’ADNc dans une plage de température de 42 –à 60 °C, offrant une spécificité accrue, des rendements plus élevés en ADNc et un produit plus complet que d’autres transcriptases inverses. Parce que le SuperScript III RT n’est pas significativement inhibé par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert, il peut être utilisé pour synthétiser l’ADNc à partir de l’ARN total. RNaseOUT L’inhibiteur de la ribonucléase recombinante, également inclus dans le mélange enzymatique, est une protéine inhibitrice de RNase qui protège contre la dégradation de l’ARN cible due à la contamination par ribonucléase de la préparation d’ARN.

Mélange
de réactionsLe mélange de réactions 2X RT inclut des oligo(dT)₂₀, des hexamères aléatoires, MgCl₂ et dNTP dans une formulation tampon optimisée pour qRT-PCR. La RNase H d’E. coli est fournie sous forme de tube séparé dans le kit pour retirer le gabarit d’ARN de la molécule hybride ADNc :ARN après la synthèse du premier brin. Il a été démontré que cela augmente la sensibilité en qRT-PCR.

Utilisation du SuperScript III First-Brand Synthesis SuperMix
Cette formulation SuperMix peut être utilisée pour quantifier moins de 10 copies d’un gène cible en qRT-PCR, avec une large plage dynamique qui permet une quantification précise de l’ARNm à haute copie à partir de jusqu’à 1 μg d’ARN total. Des réactifs sont fournis pour 50 ou 250 réactions RT de 20 μL chacune.