Invitrogen™ MultiShot™ Cellules compétentes StripWell Stbl3™

MultiShot Les cellules E. coli chimiquement compétentes de StripWell Stbl3 clonent des cellules compétentes conçues pour cloner des répétitions directes trouvées dans les vecteurs d’expression lentiviral. Stbl3 Les cellules réduisent la fréquence de la recombinaison homologue et sont pré-aliquotées dans un rack contenant 12 bandes de 8 puits afin d’augmenter la productivité lors des transformations bactériennes à débit.

Atteindre une stabilité remarquable des vecteurs lentiviraux dans Stbl3 les cellules  
MultiShot StripWell Stbl3 Competent Cells réduit la fréquence de la recombinaison homologue des répétitions directes trouvées dans les vecteurs lentiviraux (par exemple, ViraPower les kits d’expression lentivirale) et d’autres vecteurs rétroviraux (par exemple, les plasmides à base du VIH sujets à l’instabilité). La Stbl3 souche a été utilisée dans de nombreuses applications, notamment l’édition du génome, les flux de travail CRISPR, le développement de vaccins, ainsi que le clonage et le maintien de vecteurs avec plusieurs répétitions (par exemple, une protéine codant des gènes avec séquence répétée). L’efficacité de transformation des MultiShot cellules E. coli chimiquement compétentes de StripWell Stbl3 est >de 1 x 10^cfu/μg d’ADN plasmidique.

La Stbl3 souche E. coli est dérivée de la souche HB101 (avec un génome hybride de souche K-12 et B). Bien que la Stbl3 souche contienne l’allèle recA13 de la mutation recA qui réduit la survenue de la recombinaison non spécifique dans l’ADN cloné, la capacité de la Stbl3 souche à maintenir des inserts instables serait dictée par d’autres traits génétiques. Les mutations dans le Stbl3 système de restriction dépendant de la méthylation (mcrB, mrr  et hsdS20) permettent la construction d’ADN génomique de clonage. Cette souche est l’extrémitéA1+, donc une endonucléase non spécifique I qui digère l’ADN est présente dans les cellules. Stbl3 La souche produit de façon reproductible beaucoup plus d’ADN plasmidique que les souches DH (par exemple, 10 fois plus d’ADN plasmidique que la TOP10 souche) et produit durablement un lentivirus à haut titre.

MultiShot Les cellules compétentes StripWell Stbl3 offrent :  
• Efficacité attendue de >1 x 10⁷ transformants/μg d’ADN
• plasmidique Performance optimale pour la propagation de vecteurs lentiviraux et le maintien de répétitions
• directes Capacité accrue de clonage génomique de l’ADN (mcrB, mrr et hsdS20)
• Capacité à produire des rendements

élevés en ADN Note : Pour une performance optimale en maintenant des plasmides avec des séquences répétées complexes, Stbl3 les cellules doivent être cultivées à 30 °C. Lors de l’isolement de l’ADN plasmidique de Stbl3 cellules avec une endonucléase de type sauvage I (extrémitéA1+), assurez-vous que les tampons contiennent 10 mM d’EDTA. L’EDTA va inactiver l’endonucléase et éviter l’entaille de l’ADN et la dégradation des vecteurs (suivre les instructions du kit de purification de l’ADN plasmidique pour les souches terminales A1+ d’E. coli).

MultiShot Format  
flexible StripWell Chaque StripWell de huit tubes connectés est conçu avec les mêmes caractéristiques à tube unique et à usage unique que nos tubes au format One Shot. Ce format permet à toutes les étapes du protocole de transformation, jusqu’au placage, d’avoir lieu dans le même tube, ce qui permet d’économiser du temps et de réduire le risque de contamination. Après l’ajout d’ADN, MultiShot les cellules compétentes StripWell peuvent être transformées par choc thermique à 42 °C à l’aide d’un bain-marie, le tout dans le même tube.

Les tubes StripWell peuvent être coupés pour permettre des transformations dans un seul tube, éliminant ainsi le gaspillage d’aliquotes et évitant les cycles de gel-dégel qui peuvent réduire l’efficacité de la transformation.

Les avantages du MultiShot format StripWell incluent :
• Productivité—accrue adaptée à l’expérimentation•
à haut débit Transformation maximale—de flexibilité aussi faible que 1 tube ou jusqu’à 96 à partir du rack
• StripWell Commodité—familière : ajouter de l’ADN directement aux cellules, choc thermique, et récupérer dans le mêmetube

Génotype
F^– mcr B mrr hsdS20(_{r B}– mB –) recA13 supE44 ara-14 gal K2 lacY1 ProA2 rpsL20(StrR) xyl-5λ – leu mtl-1
Trouvez la souche et le format dont vous avez besoin
• D’autres souches de Stbl sont disponibles avec des origines génétiques différentes.
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De nombreuses autres souches d’E. coli et des formats de cellules chimiquement compétentes et électrocompétentes sont également disponibles pour répondre à des besoins spécifiques de transformation.
•  Pour une transformation à haut débit, choisissez parmi notre collection de MultiShot cellules comp formatées ou envoyez-nous un courriel pour des options de mise en forme personnalisées.
•  Nous offrons des milieux de croissance bactérienne sous divers formats.