Invitrogen™ mTOR[pS2448] Kit Simplex Humain ProcartaPlex™

Pour la préparation des lysats cellulaires, nous recommandons l’utilisation d’un ProcartaPlex tampon de lyse cellulaire (Cat. Non. EPX-999999-900) ou tampon d’extraction cellulaire (cat. Non. FNN0011) complétés avec 0,5 M EDTA et Halt Protéase et Inhibiteur de phosphatase à –usage unique (100X) (Cat. No 78440 ou 78442). Ces tampons ne sont pas inclus avec le panneau. Selon votre système cellulaire, d’autres tampons peuvent aussi convenir.

À propos ProcartaPlex des tests pour la Luminex plateforme

ProcartaPlex Les immunotests sont basés sur les principes d’un sandwich ELISA, utilisant deux anticorps très spécifiques se liant à différents épitopes d’une même protéine pour quantifier simultanément toutes les cibles protéiques à l’aide d’un Luminex instrument. ProcartaPlex Les tests multiplex nécessitent aussi peu que 25 μL de plasma ou de sérum ou 50 μL de surnageant en culture cellulaire et seulement quatre heures pour obtenir les résultats analysés.

• Plus de résultats par échantillon—mesurent plusieurs cibles protéiques simultanément dans un seul échantillon de 25 –à 50 μL
• Une Luminex technologie—bien établie a largement référencé une plateforme de multiplexage pour la détection et la quantification des protéines

ProcartaPlex Les essais utilisent Luminex xMAP la technologie (profilage multianalyte) pour la détection et la quantification simultanées de jusqu’à 80 cibles protéiques dans un seul échantillon de 25 –à 50 μL provenant de plasma, sérum, surnageant de culture cellulaire, lysat cellulaire et autres fluides corporels.

Les billes du ProcartaPlex test sont teintes en interne avec des proportions précises de fluorophores rouges et infrarouges afin de créer des signatures spectrales uniques pouvant être identifiées par les Luminex xMAP systèmes de détection (par exemple, Luminex 200, FLEXMAP 3D, xMAP INTELLIFLEX, xMAP INTELLIFLEX DR-SE, et MAGPIX). Luminex À l’instar d’un sandwich ELISA, le ProcartaPlex test utilise des paires d’anticorps appariées pour identifier la protéine d’intérêt. Dans un test multiplexé, chaque bille spectrale unique est marquée avec des anticorps spécifiques à une protéine cible unique, et les protéines liées sont identifiées avec des anticorps biotinylés et de la streptavidine –R-phycoythrine (EPR). La conjugaison des anticorps spécifiques à une perle distincte permet d’analyser plusieurs cibles dans un seul puits.

De plus, le xMAP système INTELLIFLEX DR-SE offre la capacité de double rapporteur, permettant la mesure d’un second paramètre de l’analyte, et offre des fonctions d’éjection latérale pour plus de flexibilité et d’automatisation. En plus ProcartaPlex des essais de signalisation, l’instrument xMAP INTELLIFLEX DR-SE permet la quantification et le multiplexage de protéines phosphorylées et totales dans le même puits, sur la même Luminex bille et dans la même analyse de test.

La différence la plus significative entre un ProcartaPlex test et ELISA est que l’anticorps de capture dans le ProcartaPlex test est conjugué à une bille et non adsorbé au puits de la microplaque, donc les ProcartaPlex réactifs du test flottent librement dans la solution. Pour la détection, l’instrument Luminex 200 , par exemple, contient deux lasers, l’un pour distinguer la signature spectrale de chaque bille et l’autre pour quantifier la quantité de fluorescence RPE, qui est proportionnelle à la quantité de protéine présente dans l’échantillon. ProcartaPlex Les tests multiplex peuvent profiler davantage de protéines cibles en utilisant beaucoup moins d’échantillons dans le même temps que pour réaliser un sandwich ELISA traditionnel.