Invitrogen™ Alexa Fluor™ 430 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

En plus des formulations de colorants réactifs, Invitrogen il offre Alexa Fluor™ 430 colorants conjugués à une variété d’anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage cellulaire et la détection.

L’ester NHS (ou ester succinimidyle) de Alexa Fluor™ 430 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant en protéine ou anticorps. Les esters du NHS peuvent être utilisés pour marquer les amines primaires (R-NH₂) des protéines, des oligonucléotides modifiés par l’amine et d’autres molécules contenant de l’amine. Le conjugué résultant Alexa Fluor™ présentera une fluorescence plus brillante et une plus grande photostabilité que les conjugués d’autres fluorophores spectrails similaires.

Informations détaillées sur cet AlexaFluor™ ester du NHS :
• Étiquetage fluorophore : Alexa Fluor™ Groupe réactif de colorants
• 430 : Réactivité des esters
• du NHS : Amines primaires sur les protéines et ligands, oligonucléotides
• modifiés par l’amine. Excitation/Émission du conjugué : 430/545 nm
• Coefficient d’extinction : 15 000 cm-1M-1
• Poids moléculaire : 701,8
• Réaction

de conjugaison typiqueRéactifs conjugués à l’amine avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour les anticorps IgG). Vous pouvez adapter la réaction à n’importe quelle quantité de protéines, mais la concentration devrait être d’au moins 2 mg/mL pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents d’étiquetage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif par rapport à la protéine.

L’ester Alexa Fluor™ NHS est généralement dissous dans du diméthylformamide anhydre (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) (D12345) de haute qualité, et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium 0,1 –0,2 M, pH 8,3, à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est plus bas que celui du groupe lysine epsilon-amino, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif de la terminale de l’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.

Purification
conjuguéeLes anticorps marqués sont généralement séparés du colorant libre Alexa Fluor™ à l’aide d’une colonne de filtration en gel, comme Sephadex™ le G-25, BioGel™ le P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, choisissez un milieu de filtration en gel avec une limite de poids moléculaire appropriée ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
• kit de purification conjugué par anticorps pour 0,5-1 mg (Cat. Non. A33086)
• kit de purification conjuguée par anticorps pour 20 à 50 μg (cat. Non. A33087)
• kit de purification conjuguée par anticorps pour 50-100 μg (cat. Non. A33088)

En savoir plus sur le marquage
Invitrogen des protéines et des anticorps, offre un large choix de kits d’étiquetage Molecular Probes™ d’anticorps et de protéines adaptés à votre matériau de départ et à votre installation expérimentale.