Thermo Scientific™ Maxima Kit de synthèse d’ADNc de première brin H Minus

Ce kit permet la synthèse de longs ADNc jusqu'à 20 kb à des températures élevées (jusqu'à 65 °C), supplantant la capacité d'autres systèmes à produire de l'ADNc de pleine longueur. Grâce à l’augmentation des taux de synthèse, la réaction peut être complétée en 30 minutes.

Pour la transcription inverse, le kit utilise Maxima le H Minus Reverse Transcriptase (RT), une enzyme avancée dérivée de l’évolution in vitro du MMLV RT.

Le Maxima kit de synthèse d’ADNc H Minus First Brand avec dsDNase offre un flux de travail considérablement simplifié qui combine l’élimination de l’ADN génomique et la synthèse de l’ADNc en une seule procédure. Le kit contient une nouvelle DNase double brin spécifique (dsDNase) conçue pour retirer l’ADN génomique contaminant des préparations d’ARN en deux minutes sans nuire à la qualité ou à la quantité d’ARN. Une activité très spécifique de la dsDNase envers l’ADN double brin garantit que l’ADN simple brin (comme l’ADNc et les amorces) n’est pas fendu, et que l’ARN traité par dsDNase peut être ajouté directement pour inverser la transcription.

Les caractéristiques du Maxima kit de synthèse d’ADNc de première brin H Minus incluent :

• Augmentation des températures—de réaction, le premier brin d’ADNc peut être synthétisé dans la plage de températures de 42 –à 65 °C
• Rendements élevés d’ADNc—de première brinche pleine longueur avec des gabarits d’ARN jusqu’à 20 kb
• Amorçage flexible—oligo(dT)₁₈, amorces hexamères aléatoires ou spécifiques à un gène
• Étape intégrée de retrait de l’ADN génomique avec kit dsDNase

Applications

• Synthèse complète de l’ADNc pour de longs transcripts et ORFs
• Transcription inverse à des températures élevées pour réduire les effets de la structure secondaire
• Clonage d’ADNc et génération de constructions
• Préparation de la bibliothèque RNA-seq & à cellule unique ARN-seq
• Caractérisation de l’isoforme et des transcriptions
• RNA-seq de longueur complète basé sur le changement de gabarit

Informations supplémentaires sur les composants de la réaction

• Maxima Le mélange d’enzymes H Minus contient Maxima du H Minus Reverse Transcriptase et RiboLock un inhibiteur de RNase. RiboLock L’inhibiteur de RNase protège efficacement les modèles d’ARN contre la dégradation par les RNases A, B et C à des températures allant jusqu’à 55 °C.
• Des amorces oligo(dT)₁₈ et des hexamères aléatoires sont fournies avec le kit. Des amorces hexamères aléatoires se lient de manière non spécifique et sont utilisées pour synthétiser l’ADNc de tous les ARN d’une population totale d’ARN. L'amorce oligo(dT)18 recuit sélectivement à l'extrémité 3' de l'ARN poly(A), synthétisant l'ADNc uniquement à partir de l'ARNm à queue poly(A). Des amorces spécifiques au gène peuvent aussi être utilisées avec le kit pour amorcer la synthèse à partir d’une séquence spécifiée.
• Le mélange dNTP de 10 mM est une solution aqueuse prémélangée de dATP, dTTP, dCTP et dGTP.
• De l’eau sans nucléase est fournie pour la mise en place de la réaction et la dilution de l’ADN de l’échantillon. L’absence d’endo-, exodésoxyribonucléases, ribonucléases et phosphatases a été confirmée par des tests de qualité appropriés.