Invitrogen™ BLOCK-iT™ Système d’expression de l’ARNi lentiviral

Un nouveau processus de clonage place un oligonucléotide d’ADN d’environ 50 pb immédiatement après un promoteur U6 pol III dans le BLOCK-iT vecteur d’entrée U6. L’oligonucléotide est conçu pour exprimer de l’ARN qui forme une structure stemLoop contenant les régions de sens et d’antisens du gène cible d’intérêt. Ce shRNA est ensuite recombiné en vecteur pLenti6/BLOCK-iT-DEST. Après la production et la transduction virales, l’ARNsh, piloté par le promoteur U6, s’intègre de façon stable sous forme de cassette ARNi. Le shRNA généré évite le mécanisme de défense de l’hôte et sera efficace pour produire la réponse de knockdown du gène ARNi. En utilisant le système d’expression BLOCK-iT de l’ARN lentiviral, une analyse à long terme du blocage génétique dans les types cellulaires et modèles animaux de mammifères en division ou non division peut être réalisée.

Le BLOCK-iT kit RNAi U6 Entry Vector Kit permet un clonage rationalisé des séquences cibles d’ARNsh pour les tests dans des expériences transitoires. Des cassettes d’expression ARNi sélectionnées sont rapidement et efficacement recombinées du BLOCK-iT vecteur d’entrée de l’ARNi U6 vers le vecteur pLenti6/BLOCK-iT-DEST via une réaction de recombinaison LR Gateway standard.

• sites attR pour une recombinaison efficace avec le vecteur d’entrée U6 Gateway™ à flanc Latt contenant la cassette ARNi
• Tous les composants nécessaires pour un emballage lentiviral efficace et une livraison du shRNA d’intérêt
• Marqueur de sélection de blasticidine pour une sélection rapide et efficace de lignées cellulaires stables exprimant l’ARNsh

Recherche sur les shRNA et miARN lentiviraux, ARNi, ARNi, épigénétique et ARN non codant, ARN à base de virus