Thermo Scientific™ Transférase désoxynucléotyl terminale (20 U/μL)

• Incorpore des nucléotides modifiés (par exemple, nucléotides marqués à la fluorescéine, à la biotine, à l’aminoallyle) Source : Cellules d’E. coli portant un gène cloné codant pour la déoxynucléotidide transférase terminale du thymus du veau

• L’absence d’endo-, exodésoxyribonucléases, phosphatases et ribonucléases a été confirmée par des tests de qualité appropriés

Source :

• Cellules d’E.coli portant un gène cloné codant pour la déoxynucléotidiyle transférase terminale du thymus du veau

• Une unité de l’enzyme catalyse l’incorporation de 1nmol de désoxythymidylate dans une fraction polynucléotidique (adsorbée sur DE-81) en 60 minutes à 37 °C
• L’activité enzymatique est analysée dans le mélange suivant :
• 200 mM de cacodylate de potassium (pH 7,2), 1 mM de_{CoCl 2}, 0,01% (v/v), Triton X-100 10 μM oligo(dT)₁₀, 1 mM dTTP et 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP
Tampon de stockage :
• L’enzyme est fournie en : 100 mM d’acétate de potassium (pH 6,8), 2 mM de 2-mercaptoéthanol, 0,01% (v/v) Triton X-100 et 50% (v/v) glycérol

Tampon de réaction 5X :

• 1M cacodylate de potassium, 125 mM Tris, 0,05% (v/v), Triton X-100 5 mM_{CoCl 2} (pH 7,2 à 25 °C)

Inhibition et inactivation :

• Inhibiteurs : chélateurs métalliques, ammonium, chlorure, iodure, ions phosphate
• Inactivé par chauffage à 70 °C pendant 10 minutes ou par ajout d’EDTA

Recommandé dans les domaines suivants :

Production d’homopolymères et hétéropolymères synthétiques (1); Résidus homopolyphérique d'ADN duplex linéaire avec tout type de terminus 3'-OH (2, 3); Marquage des oligodéoxyribonucléotides et de l’ADN (2, 4-8); 5'-RACE (Amplification rapide des extrémités de l'ADNc) (9); Localisation in situ de l’apoptose (10)

Remarque :

En raison de la présence de CoCl₂ , le TdT tampon de réaction est incompatible avec les applications en aval. Il est nécessaire d’éliminer le CoCl₂ du mélange de réaction par extraction de colonne de spin ou de phénol/chloroforme, puis par précipitation d’éthanol.