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Thermo Scientific™ T4 Polynucléotide kinase (10 U/μL)
Description
T4 La polynucléotidique kinase (T4 PNK) catalyse le transfert du gamma-phosphate vers ATP le groupe 5'-OH des ADN et ARN simple et double brin, oligonucléotides ou nucléosides 3'-monophosphates (réaction directe). La réaction est réversible. En présence d'ADP T4 , la polynucléotide kinase présente une activité 5'-phosphatase et catalyse l'échange de groupes phosphates entre les polynucléotides 5'-P-oligo-et ATP (réaction d'échange).
L'enzyme est aussi une phosphatase 3'.
- Actif dans l’enzyme de restriction, les tampons RT et T4 ADN Ligase.
- Source : Cellules d’E. coli avec un gène pseT cloné d’un bactériophage T4
- Poids moléculaire : L’enzyme est un homotétramère. Il se compose de quatre sous-unités identiques de 28,9 kDa
- L’absence d’endo-, d’exodésoxyribonucléases et de ribonucléases a été confirmée par des tests de qualité appropriés. Testé fonctionnellement pour le marquage des extrémités de 5 pieds de l’ADN
- Cellules E.coli avec un gène pseT cloné du bactériophage T4
- L’enzyme est un homotétramère. Il se compose de quatre sous-unités identiques de 28,9 kDa
- Une unité de l’enzyme transfère 1nmol de gamma-phosphate à ATP l’ADN de 5 pieds-OH en 30 minutes à 37 °C
- L’activité enzymatique est analysée dans le mélange suivant : 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 mMMgCl 2, 5 mM DTT, 0,5 mM ADN 5 pieds-OH, 0,05 mM ATP et 0,1 MBq/ml [gamma-33P]-ATP
- L’enzyme est fournie en : 20 mM de Tris-HCl (pH 7,5), 25 mM de KCl, 0,1 mM d’EDTA, 2 mM de DTT et 50% (v/v) de glycérol
- Tampon de réaction 10X A (pour la réaction directe) : 500 mM Tris-HCl (pH 7,6 à 25 °C), 100 mMMgCl 2, 50 mM DTT, 1 mM de spermidine
- Tampon de réaction B 10X (pour la réaction d’échange) : 500 mM d’imidazole-HCl (pH 6,4 à 25 °C), 180 mMMgCl 2, 50 mM DTT, 1 mM spermidine et 1 mM ADP
- Solution PEG à 24% : 24% (p/v) polyéthylène glycol 6000 Inhibition et inactivation :
- Inhibiteurs : chélateurs métalliques, ions phosphate et ammonium, KCl et NaCl à une concentration supérieure à 50 mM
- Désactivé par chauffage à 75 °C pendant 10 minutes ou par ajout d’EDTA
Recommandé dans les domaines suivants :
Marquage des extrémités de 5 pieds d’acides nucléiques (3, 4) à utiliser comme sondes pour l’hybridation, sondes pour la cartographie des transcriptes, marqueurs pour l’électrophorèse en gel, amorces pour le séquençage de l’ADN, amorces pour la PCR; 5 pieds de phosphorylation d’oligonucléotide, de produits PCR, d’autres ADN ou ARN avant la ligature; Phosphorylation des amorces PCR; Détection de la modification de l’ADN par le test post-marquage [32P] (5, 6); Élimination des groupes phosphate de 3 pieds (2)
Remarque :
Le polyéthylène glycol (PEG) et la spermidine améliorent la vitesse et l’efficacité de la réaction de phosphorylation (7). Le PEG est utilisé dans le mélange de réactions d’échange. Comme la kinase polynucléotidique est inhibée par les ions ammonium, on utilise de l’acétate T4 de sodium pour précipiter l’ADN avant la phosphorylation (1, 2).
Spécifications
Spécifications
| Concentration | 10 U/μL |
| Enzyme | T4 Polynucléotide kinase |
| Tampon compatible | Tampon de réaction 10X |
| Quantité | 2 500 unités |
| Type de produit | T4 Polynucléotide kinase |
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.