Invitrogen™ BLOCK-iT™ Kit de vecteurs d’expression d’ARN Pol II miR inductible avec EmGFP

Les BLOCK-iT™ kits de vecteurs d’expression d’ARN Pol II miR combinent les avantages des vecteurs d’ARN traditionnels (expression stable et capacité d’utiliser la délivrance virale) avec des capacités d’expression spécifique aux tissus et de mise en échec de cibles multiples à partir du même transcript. Les BLOCK-iT™ kits de vecteurs d’expression d’ARN Pol II miR et les BLOCK-iT™ systèmes d’expression d’ARN lentiviral Pol II miR sont conçus pour exprimer des miARN artificiels conçus pour avoir une homologie de 100% avec votre séquence cible et entraîneront un clivage de la cible. En utilisant Invitrogen's un RNAi Designer primé BLOCK-iT™ , plus de 70% des constructions produisent plus de 70% de knockdown.

La Invitrogen famille d’expressions de vecteurs Pol II comprend :

• Forte expression du promoteur précoce immédiat du CMV, avec l’option d’utiliser des promoteurs spécifiques au tissu ou d’autres régulations via recombinaison multisite Gateway™ .
• Compatibilité avec plusieurs Invitrogen's Gateway™ vecteurs de destination (DEST) pour l’expression génique.
• Capacité à contrôler l’initiation de la réponse ARNi avec un nouveau BLOCK-iT™ kit de vecteurs d’expression ARN Inducible Pol II miR avec EmGFP.
• Un nouveau vecteur de destination dans le système d’expression d’ARN BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentiviral PolII miR avec EmGFP. Le nouveau vecteur contient une séquence stabilisatrice d’ARNm (WPRE) et une séquence d’importation nucléaire (cPPT) qui génèrent jusqu’à 5 fois des titres viraux et des niveaux d’expression d’EmGFP plus élevés. De plus, la résistance à la blasticidine est exprimée par le promoteur Pgk-1 de la souris pour éviter l’arrêt après plusieurs passages.
• Expression co-cistronique de l’Emerald GFP (EmGFP), ce qui entraîne une corrélation entre l’expression d’EmGFP et le knockdown de votre ARN miR.
• Expression de plus d’une séquence d’ARNi miR modifiée sur le même transcript, permettant la mise en échec de plusieurs gènes simultanément et la génération de phénotypes synthétiques

Le nouveau BLOCK-iT™ kit de vecteurs d’expression d’ARN Inducible Pol II miR avec EmGFP permet de réguler les expériences d’ARNi. Ce kit contient le vecteur pT-REx-DEST30 Gateway™ qui, après des techniques simples de clonage et de déplacement, produit un vecteur d’expression d’ARNi miR adapté au knockdown inductible. Le vecteur pT-REx-DEST30 Gateway™ contient le promoteur CMV avec deux copies de la séquence de l’opérateur tétracycline (tetO2) permettant une expression de haut niveau et régulée. Cela permet d’étudier la perte de fonction dans une lignée cellulaire stable et transfectée, même si le gène d’intérêt est essentiel. De plus, l’induction de l’expression de miR ARNi peut être arrêtée afin de mesurer les changements phénotypiques lors de la récupération de la fonction génique.

Pour diverses options d’expression, la cassette miR RNAi, qui contient EmGFP (uniquement le vecteur pcDNA™6,2-GW/EmGFP-miR), les régions latérales miR et un miARN homologue à la cible d’intérêt, peut être facilement déplacée dans divers vecteurs DEST. Cela se produit par Gateway™ des réactions de recombinaison où la cassette miR ARNi est transférée dans un pDONR™ vecteur (réaction BP) puis dans un vecteur DEST (réaction LR) de choix. Le HiPerform™ système dispose du nouveau vecteur de destination pLenti6.4/RF R2/V5-DEST pour des titres viraux élevés et une expression EmGFP.