Invitrogen™ Alexa Fluor™ 647 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Alexa Fluor™ Le 647 est un colorant rouge lointain brillant et photostable avec excitation, idéalement adapté à la ligne laser de 633 nm. Utilisé pour la génération stable de signaux en imagerie et cytométrie en flux, Alexa Fluor™ le colorant 647 est soluble dans l’eau et insensible au pH du pH 4 au pH 10. La fluorescence de ce colorant à longue longueur Alexa Fluor™ d’onde n’est pas visible à l’œil humain, mais elle est facilement détectée par la plupart des systèmes d’imagerie. En plus des formulations de colorants réactifs, nous offrons Alexa Fluor™ 647 colorants conjugués à une variété d’anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection cellulaires.

L’ester NHS (ou ester succinimidyle) de Alexa Fluor™ 647 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters du NHS peuvent être utilisés pour marquer les amines primaires (R-NH₂) des protéines, des oligonucléotides modifiés par l’amine et d’autres molécules contenant de l’amine. Le conjugué résultant Alexa Fluor™ présentera une fluorescence plus brillante et une plus grande photostabilité que les conjugués d’autres fluorophores spectrails similaires.

Informations détaillées à ce AlexaFluor™ sujet Ester NHS :
Étiquette fluorophore : Alexa Fluor™ 647 colorants
groupe réactif : Réactivité des esters
du NHS : Les amines primaires sur les protéines et les ligands, les oligonucléotides
modifiés par l’amine Ex/Em du conjugué : Coefficient d’extinction 651/672 nm
: 270 000 ^{cm-1 M-1}
Colorants spectralement similaires : Cy5™
Poids moléculaire : ∼1250

Réaction
de conjugaison typiqueVous pouvez conjuguer des réactifs réactifs à l’amine avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour les anticorps IgG). Vous pouvez adapter la réaction à n’importe quelle quantité de protéines, mais la concentration devrait être d’au moins 2 mg/mL pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents d’étiquetage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif par rapport à la protéine.

L’ester Alexa Fluor™ NHS est généralement dissous dans du diméthylformamide anhydre (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) (D12345) de haute qualité, et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium 0,1 –0,2 M, pH 8,3, à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est plus bas que celui du groupe lysine epsilon-amino, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif de la terminale de l’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.

Consultez le manuel d’utilisateur pour les instructions de solubilité.

Purification
conjuguéeLes anticorps marqués sont généralement séparés du colorant libre Alexa Fluor™ à l’aide d’une colonne de filtration en gel, comme Sephadex™ le G-25, BioGel™ le P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, choisissez un milieu de filtration en gel avec une limite de poids moléculaire appropriée ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué anticorps :
kit de purification conjugué par anticorps pour 0,5 à 1 mg (Cat. Non. A33086)
Trousse de purification conjuguée par anticorps pour 20-50 μg (Cat. Non. A33087)
kit de purification conjuguée par anticorps pour 50-100 μg (Cat. Non. A33088)

En savoir plus sur le marquage
des protéines et des anticorps Nous offrons une large sélection de kits d’étiquetage Molecular Probes™ d’anticorps et de protéines adaptés à votre matériau de départ et à votre installation expérimentale. Consultez nos kits de marquage des anticorps ou utilisez notre outil de sélection de la chimie du marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits d’étiquetage, lisez la section 1.2 des kits pour le marquage des protéines et des acides—nucléiques dans le Molecular Probes™ Manuel.

Nous allons’vous fabriquer un conjugué
personnaliséSi vous’ne trouvez pas ce que vous’cherchez dans notre catalogue en ligne, nous’vous préparerons un anticorps ou un conjugué protéique personnalisé. Notre service de conjugaison personnalisée est efficace et confidentiel, et nous assumons la qualité de notre travail. Nous sommes ISO certifiés 13485:2000.