Invitrogen™ Alexa Fluor™ 488 C₅ Maleimide

Alexa Fluor™ Le 488 C 5 Maleimide est un colorant fluorescent vert vif avec excitation idéalement adapté à la ligne laser de 488 nm. Utilisé pour la génération stable de signaux en imagerie et cytométrie en flux, Alexa Fluor™ le colorant 488 est soluble dans l’eau et insensible au pH du pH 4 au pH 10. En plus des formulations de colorants réactifs, nous offrons Alexa Fluor™ 488 colorants conjugués à une variété d’anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection cellulaires.

Le dérivé maléimide de Alexa Fluor™ 488 est l’outil le plus populaire pour conjuguer le colorant à un groupe thiol sur une protéine, un oligonucléotide thiophosphate, ou un ligand à faible poids moléculaire. Les 488 conjugués résultants Alexa Fluor™ présentent une fluorescence plus brillante et une meilleure photostabilité que les conjugués d’autres fluorophores spectrails similaires.

Informations détaillées sur ce AlexaFluor™ maléimide :
Étiquetage fluorophore : Alexa Fluor™ Groupe réactif de colorants
488 : Réactivité maléimide
: groupes thiol sur les protéines et ligands, thiophosphates
oligonucléotidiques Ex/Em du conjugué : Coefficient d’extinction de 493/516 nm
: 72 000 cm-1M-1
Colorants spectralement similaires : Fluorescéine (FITC), Cy™2
Poids moléculaire : 720,66

Réaction
de conjugaison typiqueLa protéine doit être dissoute à une concentration de 50-100 μM dans un tampon approprié (10-100 mM phosphate, Tris ou HEPES) au pH 7,0-7,5. Dans cette plage de pH, les groupes thiol protéiques sont suffisamment nucléophiles pour réagir presque exclusivement avec le réactif en présence des groupes amine protéique, plus nombreux, qui sont protonés et relativement peu réactifs. Nous recommandons de réduire toute liaison disulfure à ce stade en utilisant un excès molaire de 10 fois d’agent réducteur tel que DTT ou TCEP. L’excès de DTT doit être éliminé par dialyse et une modification du thiol doit être effectuée dans des conditions sans oxygène afin d’empêcher la formation des liaisons disulfure; ces précautions ne sont pas nécessaires lors de l’utilisation du TCEP avant la conjugaison de la maléimide.

La Alexa Fluor™ maléimide est généralement dissoute dans du diméthylsulfoxyde anhydre de haute qualité (DMSO) à une concentration de 1 à 10 mM juste avant l’utilisation, et les solutions d’origine doivent être protégées de la lumière autant que possible. Généralement, cette solution d’origine est ajoutée goutte dans la protéine en remuant pour produire environ 10 à 20 moles de réactif par mol de protéine, et la réaction est laissée à température ambiante pendant 2 heures ou à 4 °C pendant la nuit, protégée de la lumière. Tout réactif thiol-réactif non réagi peut être consommé en ajoutant un excès de glutathion, de mercaptoéthanol ou d’autres thiols solubles de faible poids moléculaire.

Purification
conjuguéeLes anticorps marqués sont généralement séparés du colorant libre Alexa Fluor™ à l’aide d’une colonne de filtration en gel, comme Sephadex™ le G-25, BioGel™ le P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, choisissez un milieu de filtration en gel avec une limite de poids moléculaire appropriée ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué anticorps :
kit de purification conjugué par anticorps pour 0,5 à 1 mg (Cat. Non. A33086)
Trousse de purification conjuguée par anticorps pour 20-50 μg (Cat. Non. A33087)
kit de purification conjuguée par anticorps pour 50-100 μg (Cat. Non. A33088)

En savoir plus sur le marquage
des protéines et des anticorps Nous offrons une large sélection de kits d’étiquetage Molecular Probes™ d’anticorps et de protéines adaptés à votre matériau de départ et à votre installation expérimentale. Consultez nos kits de marquage des anticorps ou utilisez notre outil de sélection de la chimie du marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits d’étiquetage, lisez la section 1.2 des kits pour le marquage des protéines et des acides—nucléiques dans le Molecular Probes™ Manuel.

Nous allons’vous fabriquer un conjugué
personnaliséSi vous’ne trouvez pas ce que vous’cherchez dans notre catalogue en ligne, nous’vous préparerons un anticorps ou un conjugué protéique personnalisé. Notre service de conjugaison personnalisée est efficace et confidentiel, et nous assumons la qualité de notre travail. Nous sommes ISO certifiés 13485:2000.