Thermo Scientific™ Solution DNase I (1 unité/μL), sans RNase

La désoxyribonucléase I (DNase I) est un seul polypeptide glycosylé qui dégrade l’ADN simple et double brin non désiré. L'enzyme agit en cliquant l'ADN en fragments de phosphodinucléotide 5' et de petits oligonucléotidiques. La DNase I est couramment ajoutée aux réactifs de lyse cellulaire pour éliminer la viscosité causée par la teneur en ADN dans les lysats cellulaires bactériens ou pour retirer les gabarits d’ADN des ARN produits par transcription in vitro. Deux grades d’ADNase sont proposés, l’un suffisant pour le travail sur les protéines et l’autre utile pour toute application nécessitant la digestion de l’ADN, où il est crucial d’éviter des dommages à l’ARN.

Points clés :

• Dégrade et élimine l’ADN indésirable des échantillons
• Cliquettes d’ADN simple brin et double brin
• Compatible avec Thermo Scientific Pierce les réactifs de lyse cellulaire
• Réduit la viscosité des lysats bactériens (extraits protéiques) pour faciliter la pipetage
• Fourni sous forme de 50% de glycérol dans 10mM Tris-HCl pH 7,5, 10mM_{CaCl 2}, 10mM MgCl₂
• Disponible en deux formats pratiques : testé par RNase pour protéger l’ARN (Partie no 89836) et qualité d’extraction protéique pratique (Partie no 90083)

• Des ions calcium sont nécessaires à l’activité de la DNase I, et de traces de Ca++ peuvent être présentes à des concentrations suffisamment élevées pour que la DNase I soit active; cependant, l’utilisation d’EGTA ou de tampons sans calcium peut réduire l’activité de la DNase I à des niveaux indétectables
• Des niveaux élevés (c.-à-d. 100 mM) d’ions monovalents comme Na+ et K+ diminuent l’activité de la DNase I
• La DNase I est inactivée en chauffant à 65 °C pendant 10 minutes
• Unité de Kunitz : 1 unité de Kunitz est la quantité d’enzyme nécessaire pour provoquer une augmentation de l’absorption à 260 nm de 0,001/min/mL à 25 °C dans 0,1 M de NaOAc, pH 5,0, en raison de la dégradation de l’ADN hautement polymérisé
• Unités de test de dégradation : 1 unité est définie comme la quantité d’enzyme nécessaire pour dégrader complètement 1 mg d’ADN plasmidique en 10 minutes à 37 °C dans 10 mM Tris-HCl, pH 7,5, 50 mM_{MgCl 2}, 13 mM CaCl₂

• Visuel : Liquide clair
• Concentration : 1 unité/mL
• Activité : ≥ 100 000 unités/mg de protéine
• Contamination par RNase : 20 unités libèrent < 2% de précipité non éthanol lorsqu’elles sont incubées avec de l’ARN Poly(A) marqué en 3H
• Analyse fonctionnelle : L’enzyme 1 μL dégrade < 5% d’ARN mais dégrade 100% d’ADN

• Visuel : Liquide clair, incolore, exempt de matière insoluble
• Unités : ≥2500 unités/mL
• Définition de l’unité : 1 unité est définie comme la quantité d’enzyme nécessaire pour produire une augmentation d’absorption à 260 nm de 0,001/min/mL à 25 °C d’ADN hautement polymérisé

• Élimination de la viscosité causée par l’ADN dans les lysats cellulaires protéiques
• Retrait des modèles d’ADN provenant d’ARN produits par transcription in vitro