Thermo Scientific™ SILAC Trousse de quantification des protéines (trypsine), RPMI 1640

Les caractéristiques du SILAC kit de quantification des protéines, RPMI 1640, incluent :
• Efficacité—jusqu’à 100% d’incorporation du marquage dans les protéines des cellules•
vivantes Reproductible—minimise la variabilité intra-expérimentale causée par la préparation•
différentielle de l’échantillon Milieux flexibles—déficients à la fois en L-lysine et en L-arginine, permettant une couverture protéomique plus complète grâce au marquage
• isotopique à double acide aminé Compatible—protéines marquées exprimées dans une grande variété de lignées cellulaires de mammifères adaptées à la croissance dans un milieu RPMI 1640, incluant HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat et d’autres
• suppléments—de haute qualité riches en acides aminés avec >99% de pureté isotopique; FBS dialysé testé pour aider à garantir qu’il est stérile, exempt d’endotoxines et compatible

avec la culture cellulaire. Applications du kit de SILAC quantification des protéines :
• Analyse quantitative des changements relatifs de l’abondance protéique due à différents traitements cellulaires Analyse quantitative de protéines pour lesquelles il n’existe pas d’anticorps disponibles
• Profilage d’expression protéique pour étudier les cellules
• normales vs pathologiques L’identification et la quantification de centaines à milliers de protéines dans une seule expérience SILAC

est une méthode puissante pour identifier et quantifier les changements différentiels relatifs dans des échantillons de protéines complexes.
• Cette approche implique l'incorporation métabolique in vivo de ¹³acides aminés « lourds » marqués en C ou ¹⁵N dans les protéines, suivie d'une spectrométrie de masse (EM) pour l'identification, la caractérisation et la quantification accélérées et complètes des protéines.

Comme les peptides marqués avec des acides aminés lourds et légers sont chimiquement identiques, ils coéluent lors de la pré-fractionnement en colonne en phase inverse et sont donc détectés simultanément lors de l’analyse de la SEP. Les intensités de pic relatives de plusieurs peptides isotopiques distincts de chaque protéine sont ensuite utilisées pour déterminer la variation moyenne de l’abondance protéique dans l’échantillon traité.

Les kits de trypsine SILAC sont fournis avec ¹³_C-6 ¹⁵N <sub2 L-lysine-2HCl et ¹³C₆ ¹⁵N₄ L-arginine-HCl pour marquer et quantifier les peptides contenant de la lysine et de l’arginine issus de la digestion des protéines trypsiniques. Chaque kit comprend aussi 2 x 500 mL de sérum médium et dialysé. Lorsqu’ils sont combinés à Thermo Scientific des produits d’enrichissement d’échantillons protéiques/peptidiques, SILAC les kits de quantification des protéines permettent également l’analyse en SEP de protéines à faible abondance telles que les protéines de surface cellulaire, les protéines spécifiques aux organites, et des modifications post-traductionnelles des protéines telles que la phosphorylation ou la glycosylation.