Thermo Scientific™ SILAC Trousse de quantification des protéines (LysC), RPMI 1640

Thermo Scientific SILAC Le kit – de quantification des protéines RPMI 1640 est utilisé pour l’analyse spécifique de l’expression protéique par spectrométrie de masse en utilisant le marquage isotopique stable avec des acides aminés en culture cellulaire (). SILAC

Le marquage d’isotopes stables avec des acides aminés en culture cellulaire (SILAC) est une méthode puissante pour identifier et quantifier les changements différentiels relatifs dans des échantillons de protéines complexes. Cette approche implique l’incorporation métabolique in vivo d’acides “aminés lourds” marqués au 13C ou au 15N dans les protéines, suivie d’une spectrométrie de masse (SEP) pour l’identification, la caractérisation et la quantification accélérées et complètes des protéines.

Comme les peptides marqués avec des acides aminés lourds et légers sont chimiquement identiques, ils coéluent lors de la pré-fractionnement en colonne en phase inverse et sont donc détectés simultanément lors de l’analyse de la SEP. Les intensités de pic relatives de plusieurs peptides isotopiques distincts de chaque protéine sont ensuite utilisées pour déterminer la variation moyenne de l’abondance protéique dans l’échantillon traité.

Chaque kit comprend tous les réactifs nécessaires pour marquer les cellules isotopiquement avec 13C6 L-lysine-2HCl, incluant des milieux de médium, des acides aminés lourds et légers ainsi que du sérum dialysé. Les dérivés lourds de L-arginine-HCl (Partie no 88210, 89990) sont disponibles séparément et peuvent être combinés avec des kits de quantification des protéines Pierce SILAC pour améliorer la couverture des marquages isotopiques peptidiques. Les kits sont compatibles avec les lignées cellulaires de mammifères adaptées pour croître dans des milieux DMEM ou RPMI 1640. Des kits avec formulations de milieux spécialisés sont également disponibles pour les lignées de cellules souches humaines et murines. Lorsqu’ils sont combinés avec Thermo Scientific des produits d’enrichissement d’échantillons protéiques/peptidiques, les kits de quantification des protéines Pierce SILAC permettent également l’analyse en SEP de protéines à faible abondance telles que les protéines de surface cellulaire, les protéines spécifiques aux organites et des modifications post-traductionnelles des protéines telles que la phosphorylation ou la glycosylation.

Recommandé pour : Analyse quantitative des changements relatifs d’abondance protéique causés par différents traitements cellulaires; Analyse quantitative des protéines pour lesquelles il n’y a pas d’anticorps disponibles; Profilage de l’expression protéique des cellules normales versus des cellules pathologiques; Identification et quantification de centaines à des milliers de protéines dans une seule expérience

• Incorporation efficace—à 100% du marquage dans les protéines des cellules vivantes
• Reproductible—élimine la variabilité intra-expérimentale causée par la préparation différentielle de l’échantillon
• Milieux flexibles—déficients à la fois en L-lysine et en L-arginine, permettant une couverture protéomique plus complète grâce au marquage isotopique double des acides aminés
• Protéines marquées compatibles—exprimées dans une grande variété de lignées cellulaires de mammifères adaptées pour croître dans le milieu RPMI 1640, incluant HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat et d’autres
• Suppléments—de haute qualité riches en acides aminés avec >99% de pureté isotopique; dialysé testé par FBS pour garantir qu’il est stérile, sans endotoxines et compatible avec la culture cellulaire