Gibco™ Trousse de différenciation des neurones dopaminergiques PSC

Le kit est un système en trois étapes utilisé sur 35 jours, avec des composants ajoutés séquentiellement pour spécifier les PSC à la plaque plancher du mésencéphale, étendre les cellules progénitrices de la plaque plancher et différencier les cellules progénitrices de la plaque plancher en neurones dopaminergiques fonctionnels du mésencéphale. Chaque composant est testé pour assurer la génération du bon phénotype, et les neurones dopaminergiques du mésencéphale ont été testés fonctionnellement pour leur capacité à produire un potentiel d’action spontané et à libérer de la dopamine lors de la dépolarisation.

Étape 1 : Spécification des PSC dans les cellules de plaque de plancher du mésencéphale
Lors du développement du système nerveux central, les neurones dopaminergiques du mésencéphale proviennent d’une population distincte de cellules appelées cellules de plaque de plancher du mésencéphale, qui se forment durant les jours 21 –à 28 de gestation et se situent le long de la ligne médiane ventrale du tube neural en développement. Des rapports récents se sont concentrés sur l’importance de différencier les hPSC en cellules de cette région, plutôt que d’utiliser une population plus générique de cellules souches neuronales, afin de créer de véritables neurones dopaminergiques du mésencéphale. La première étape dans la création de neurones dopaminergiques à l’aide du kit de différenciation des neurones dopaminergiques PSC est la spécification des hPSC dans des cellules progénitrices de plancher (FP) spécifiées par le mésencéphale dans un milieu complet de spécification de plaque de plancher.

Étape 2 : Créer une population bancable de cellules progénitrices de plancher
Les méthodes standard de création de neurones dopaminergiques du mésencéphale impliquent des protocoles longs qui sont continus et non évolutifs. À l’aide du kit de différenciation des neurones dopaminergiques PSC, une banque fonctionnelle de cellules progénitrices de plancher qui maintiennent l’identité du mésencéphale est créée.

La capacité de stocker les cellules progénitrices à cette étape permet :
• Une augmentation significative de la pureté des neurones DA Capacité à étendre les expériences au-delà des limites
• actuelles Capacité à distribuer les cellules entre pairs ou à décongeler pour une utilisation

ultérieure Étape 3 :
• Différenciation des cellules précurseurs de la plaque de sol vers les neurones
dopaminergiques du mésencéphale La dernière étape du protocole du kit de différenciation des neurones dopaminergiques PSC consiste à différencier les cellules progénitrices de la plaque de sol en neurones dopaminergiques du mésencéphale. Il a été démontré que les neurones dopaminergiques générés durant cette étape maintiennent l’identité du mésencéphale, présentent un profil d’expression génique équivalent à celui des neurones générés selon des protocoles publiés, et présentent une fonctionnalité telle que démontrée par un potentiel d’action spontané et la libération de dopamine lors de la dépolarisation.