Thermo Scientific™ Pierce™ Étalons quantitatifs des tests & peptidiques

• Les sensibles—détectent avec précision aussi peu que 5 μg/mL (fluorométrique) ou 25 μg/mL (colorimétrique) de mélange
• peptidique Performance du test reproductible—rigoureusement testée avec des mélanges
• de digestion peptidique Le kit standard—robuste de digestion peptidique comprend un standard validé pour la digestion peptidique pour améliorer la reproductibilité de la quantification Compatible—
•fonctionne avec de nombreux réactifs, y compris les réactifs de préparation d’échantillons MS et les peptides marqués TMT (test fluorométrique).
• Format pratique—et facile à mélanger et lire avec un signal stable pouvant être lu en aussi peu que 5 minutes (fluorométrique) ou 15 minutes (colorimétrique).

Le test quantitatif de peptides colorimétriques Pierce fournit des modifications BCA des réactifs pour la réduction de Cu+2 en Cu+1, un chélateur propriétaire optimisé pour la quantification des mélanges peptidiques, et une norme de référence pour la digestion des peptides destinée à la génération de courbes standard linéaires de contrôle. Ce test peptidique colorimétrique nécessite une petite quantité d’échantillon (20 μL) et a une plage de concentration de peptides de travail de 25 –1000 μg/mL. Lors de la réaction, le cuivre est d’abord réduit par la colonne vertébrale amidique des peptides dans des conditions alcalines (réaction de Biuret), suivi du couplage chélateur avec le cuivre réduit pour former un complexe rouge vif (absorbé à 480 nm) qui peut être lu en aussi peu que 15 minutes. Le signal produit par cette réaction est 3 –à 4 fois plus sensible que celui du test protéique Micro-BCA pour l’analyse peptidique. Le test colorimétrique peptidique est compatible avec les peptides marqués par TMT, mais n’est pas recommandé pour les peptides synthétiques car le test est influencé par la teneur en acides aminés peptidiques.

Les réactifs du test quantitatif de peptides fluorescents Pierce incluent un tampon de test peptidique, un réactif de marquage de peptides fluorescents et une norme de test de digestion peptidique pour la mesure quantitative des concentrations de peptides. Ce test sensible ne nécessite que 10 μL d’échantillon, produit une réponse linéaire avec des concentrations croissantes de peptides (5 –1000 μg/mL), et donne une fluorescence finale stable pouvant être détectée en aussi peu que 5 minutes. Dans ce test, les peptides sont spécifiquement marqués à l’extrémité aminée à l’aide d’un réactif fluorescent réactif à l’amine, non fluorescent jusqu’à sa réaction avec des peptides tryptiques. Les peptides marqués fluorescentement sont détectés sur un lecteur de microplaques (ex390/EM475). Cet essai convient à la mesure quantitative de mélanges de digestion peptidique et de peptides synthétiques avec une extrémité amino non bloquée. Les tests fluorescents ne sont pas compatibles avec les peptides marqués par TMT.

Thermo Scientific La norme Peptide Digest Assay Standard a été conçue comme une norme de référence pour une utilisation avec les tests quantitatifs de peptides fluorométriques et colorimétriques de Pierce afin d’améliorer la reproductibilité et la précision de la quantification des peptides. La norme de test de digestion des peptides est fournie sous forme liquide prête à l’emploi à 1 mg/mL. La protéine de référence a été digérée avec de la trypsine de qualité SEP afin de minimiser les clivages manqués. Pour assurer une performance constante, l’efficacité de la digestion de la protéine est surveillée afin d’assurer la cohérence du lot à l’autre, et la qualité est évaluée par comparaison avec une norme de référence.

Applications
• Normalisation des concentrations d’échantillons pour des applications •
quantitatives en aval Normalisation des volumes de charge d’échantillons pour les applications
• LC, MS et LC/MS Mesure de la récupération après les procédures de nettoyage des peptides