Thermo Scientific™ Pierce™ Agarose Avidin monomérique

Le kit et les résines Pierce Monomeric Avidin sont uniques parmi les supports de liaison à la biotine en permettant une purification par affinité non dénaturante des molécules biotinylées. La protéine avidine monomérique immobilisée se lie à la biotine avec une grande spécificité et une affinité modérée, permettant de laver les molécules non biotinétiques puis d’éluer compétitivement les molécules marquées à la biotine à l’aide de biotine 2mM dans du sérum tampon phosphaté (PBS). Cette technique offre les conditions d’élution les plus douces pour la purification des protéines biotinylées et évite la contamination ainsi que d’autres problèmes associés aux méthodes traditionnelles d’avidine et de streptavidine. La colonne d’avidine monomérique peut alors être régénérée en utilisant 0,1 M de glycine pour retirer la colonne de biotine résiduelle liée sans perdre la capacité de se lier à un autre échantillon biotinylé.

Avec l’avidine ou la streptavidine typiques, l’affinité de liaison à la biotine (Kd = ^10-15M) est telle que la purification avec ces milieux traditionnels nécessite des conditions de dénaturation pour l’élution, comme 8M Guanidine·HCl au pH 1,5 ou une ébullition dans le tampon de chargement d’échantillons SDS-PAGE réduit. En plus de leurs effets néfastes sur la protéine biotinylée d’intérêt, ces conditions d’élution sévères provoquent généralement le détachement de la résine par des protéines superflues (c’est-à-dire les sous-unités avidine ou streptavidine) et co-éluées avec le produit de purification désiré. En revanche, lorsque l’avidine est couplée à une résine (par exemple, l’agarose perlée réticulée ou UltraLink la résine) comme monomère de la sous-unité, sa spécificité pour la biotine est conservée, mais son affinité de liaison à la biotine diminue à un niveau (Kd = ^10-8M) propice à une élution ultérieure.

Points clés :

• Le produit non dénaturant – purifie les produits biotinylés en utilisant des conditions d’élution douces (biotine libre de 2 mM)

• L’agarose monomérique réutilisable – d’Avidine peut être régénérée et réutilisée au moins 10 fois, avec seulement une perte marginale de la capacité de liaison à la biotine (environ 2,5% de diminution par régénération)

• Le spécifique – conserve la spécificité de liaison à la biotine et une faible liaison non spécifique de l’avidine native

• Échantillons de liaison flexible – dans divers tampons physiologiques et élue soit avec 0,1M glycine, soit par compétition avec 2 mM de biotine

• Bonne capacité – de liaison supérieure à 1,2 mg de BSA/mL biotinylé de résine

• Achat pratique – de l’agarose ou UltraLink™ des résines autonomes, ou un kit de purification complet avec colonne préemballée et tampons

Caractéristiques spécifiques à chaque article :

• Les résines d’agarose et le kit sont basés sur de l’agarose perlée réticulée à 4%
• UltraLink La résine est un support acrylamide (UltraLink Biosupport)

Comprend :

Le kit contient une colonne préemballée d’agarose Avidine monomérique ainsi que des tampons de reliure et d’élution.