Thermo Scientific™ Pierce™ Trousse de test lumineux à la luciférase gaussia

Le Thermo Scientific Pierce kit de test glow de la luciférase de Gaussia fournit un système de bioluminescence sensible permettant de déterminer l’expression d’un gène d’intérêt avec un rapporteur luciférase. Le signal de bioluminescence extrêmement brillant et stable (demi-vie supérieure à 1 heure) est produit en présence du rapporteur luciférase Gaussia-Dura en raison de l’oxydation du substrat luciférase coelenterazine (Figure 1). La luciférase gaussia est une protéine de 20 kDa provenant du copépode marin, Gaussia princeps, qui possède une stabilité protéique et une luminosité de signal supérieures à celles des lucioles et de la luciférase indigène Renilla. L’enzyme bioluminescente est fortement sécrétée dans le milieu de culture cellulaire, permettant la surveillance vivante de l’activité des rapporteurs. La sortie lumineuse générée par la réaction de la luciférase peut être corrélée à la quantité de protéine de luciférase de Gaussia produite et utilisée pour déterminer l’activité du promoteur qui guide l’expression de Gaussia.

Caractéristiques du kit de test glow de la Gaussia Luciférase :

• Détection sensible—et très sensible de l’activité de la luciférase de Gaussia
• Stabilité—accrue du signal
• Simple—ne nécessite pas de luminomètre avec injecteurs
• Réactifs d’essai compatibles—avec d’autres luciférases de Gaussia
• Compatible—avec l’automatisation, adapté à des tests à haut débit
• Convenient—contient un tampon universel de lyse cellulaire et un réactif optimisé pour le test glow
• Safe—permet de réaliser des tests non radioactifs

Lorsqu’il est utilisé avec Thermo Scientific des vecteurs Gaussia-Dura Luc, le kit fournit un système de test de rapporteur bioluminescent extrêmement sensible pour détecter l’activité sécrétée ou intracellulaire de la luciférase issue de l’activation du promoteur ou de la voie avec une stabilité accrue du signal. La lumière produite par la réaction luciférase (maximum d’émission de 485 nm) indique que la luciférase de Gaussia a été transcrite. Cette émission lumineuse peut être corrélée à la quantité de protéine luciférase produite, qui est proportionnelle à l’activité du promoteur pour l’expression de la luciférase de Gaussia et indique que la région régulatrice du gène cible était active. Cette réaction ne nécessite pas d’adénosine triphosphate (ATP) ni d’autres cofacteurs. Le kit comprend un tampon de lyse cellulaire, un tampon de réaction et un substrat, et peut être utilisé pour détecter l’activité de toute luciférase ou dérivé de Gaussia qui utilise la coelenterazine comme substrat.

Le kit d’analyse lumineuse de la luciférase Gaussia nécessite :

Gaussia luciférase et luminomètre ou autre instrument capable de surveiller la luminescence, comme Thermo Scientific Varioskan LUX les lecteurs de microplaques.

Applications du kit de test glow à la luciférase de Gaussia :

• Études promoteurs pour analyser les éléments cis-régulateurs et les facteurs trans-agissant
• Dépistage de drogues
• Dépistage des ARN et des miARN
• Tests multiplexés pour étudier les effets hors cible
• Essais de reportage sur la voie sécrétrice/localisation des protéines
• Analyse des voies de transduction du signal
• Études de splicing d’ARN

Le gène Gaussia-Dura utilisé dans les Thermo Scientific vecteurs Gaussia-Dura Luc est dérivé du gène sauvage Gaussia et offre une sortie de lumière tout aussi brillante mais plus stable. Le réactif Gaussia Glow Assay Kit produit une réaction luciférase Gaussia-Dura avec une cinétique de type glow qui fournit un signal d’intensité plus faible mais de plus longue durée, permettant un débit d’échantillon plus élevé. Ce test de type glow avec un signal de luminescence prolongé ne nécessite pas d’injecteurs de réactifs et est recommandé pour les luminomètres sans injecteurs ou pour les applications nécessitant un traitement par lots d’échantillons.