Thermo Scientific™ Pierce™ Kit classique magnétique IP/Co-IP

Caractéristiques du kit classique magnétique IP/Co-IP :

• Des billes magnétiques compatibles—à base de protéines recombinantes A/G assurent la compatibilité avec la plupart des anticorps primaires, qu’ils soient de souris ou de lapin
• L’immunoprécipitation rapide—en aussi peu que 30 minutes pour réduire le fond de fond et améliorer la capture des complexes protéiques transitoires
• Immobiliser nettoyement—votre anticorps pour éviter la contamination de votre éluat
• Résistance—, aucune lixiviation des protéines A/G en présence de détergents, de tampons à faible pH ou de solvants courants en spectrométrie de masse
• Un immunoprécipit efficace—avec la moitié du volume recommandé de particules magnétiques comparé à d’autres billes magnétiques
• Pratique—, le kit complet de Co-IP contient les billes magnétiques et tous les tampons essentiels pour compléter des expériences d’immunoprécipitation

Ce kit d’immunoprécipitation utilise des billes magnétiques protéiques A/G de haute qualité Thermo Scientific Pierce , des tampons optimisés et un protocole flexible pour obtenir des IP ou co-IP à haut rendement avec des outils manuels ou automatisés de séparation magnétique. Le tampon Lyse/Wash optimisé optimise le rendement et la liaison efficace des interactions anticorps-antigène et co-IP. Le tampon d’élution relativement doux et à faible pH dissocier le complexe immunitaire lié de la protéine A/G. Alternativement, le tampon d’échantillon de marqueurs de voie inclus fournit une élution rapide et dénaturante pour une analyse directe SDS-PAGE des produits IP.

Comprend :

Billes magnétiques Pierce Protein A/G, tampon de lyse/lavage, tampon d’élution, tampon de neutralisation et tampon de charge d’échantillons

L’immunoprécipitation avec des particules magnétiques est réalisée de manière similaire à l’IP avec de l’agarose perlée, sauf que les séparations se font à l’aide d’un aimant plutôt que par centrifugation. L’anticorps spécifique est d’abord ajouté à l’échantillon pour former un complexe immunitaire qui est ensuite lié aux billes magnétiques. Le complexe est lavé pour éliminer le matériau non lié et un tampon d’élution à faible pH dissocier le complexe immunitaire lié de la protéine A/G. Alternativement, le tampon d’échantillon Lane Marker est inclus pour la dissociation utilisant des conditions de dénaturation ou pour la préparation d’échantillons en aval pour l’analyse SDS-PAGE. Le kit comprend Thermo Scientific Pierce des billes magnétiques Protein A/G pour une isolation magnétique rapide et pratique des antigènes ainsi que des tampons optimisés pour un rendement antigénique élevé. Les billes sont retirées manuellement de la solution à l’aide d’un support magnétique ou par automatisation avec un instrument comme l’instrument Thermo Scientific KingFisher Flex.

On sait généralement que des temps d’incubation d’échantillons d’anticorps plus longs (de 2 heures à la nuit) offrent généralement des rendements plus élevés dans les tests IP. On suppose souvent que ce rendement plus élevé s’accompagne d’un fond accru. Nos chercheurs ont constaté que la liaison d’un échantillon d’anticorps pendant la nuit, suivie d’une immunoprécipitation avec le kit Pierce Classic Magnetic IP/Co-IP, tend à augmenter le rendement, mais n’augmente pas le fond de production. Ainsi, nous recommandons aux chercheurs d’effectuer cette étape de liaison pendant au moins 1 heure chaque fois que possible.

Résumé du protocole :

• Incubez le lysat cellulaire avec l’anticorps IP pendant 1 à 2 heures à température ambiante ou toute la nuit à 4 °C.
• Liez le complexe antigène-anticorps aux billes magnétiques de la protéine A/G pendant 1 heure à température ambiante.
• Laver les billes deux fois avec IP Lysis/Wash Buffer et une fois avec de l’eau purifiée.
• Éluez le complexe antigène/anticorps.

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