Invitrogen™ Digitonine (5%)

La digitonine, aussi appelée digitin, est un détergent doux, non ionique, avec une structure semblable au cholestérol qui lui permet de solubiliser les lipides dans l’eau. Il est utile pour perméabiliser les cellules et peut être utilisé comme contrôle positif de la chimie cytotoxice. De plus, elle préserve l’environnement lipidique naturel dans les complexes protéiques membranaires et peut être utilisée pour solubiliser les protéines liées à la membrane. La digitonine a une formule moléculaire de C_56H92O29 et un poids moléculaire de 1229 Daltons.

La solution de détergent Digitonin a beaucoup plus d’applications. Il est utilisé pour préparer des échantillons de protéines natives pour analyse sur le NativePAGE système Gel. Inclus dans le kit de préparation d’échantillons NativePAGE (numéro de cat. BN2008), cette solution détergente prête à l’emploi améliore la solubilité des protéines hydrophobes et membranaires lors de la préparation de l’échantillon. Les échantillons préparés avec 10% de DDM, 5% de digitonine ou le kit de préparation d’échantillons NativePAGE sont compatibles avec NativePAGE Novex les Bis-Tris Gels pour l’électrophorèse native et offrent une résolution accrue et une réduction des stries. De plus, avant la détermination structurale par cryo-EM ou cristallisation, la digitonine peut être utilisée pour solubiliser les protéines membranaires (typiquement à 1,2 –% en mousse/v) et comme tampon de lavage.

Il est important de noter pour la préparation de l’échantillon que la taille des micelles du détergent digitonine est ∼de 70 kDa et est généralement utilisée à une concentration 1 –2 fois supérieure à la concentration critique des micelles (CMC).

De plus, la digitonine peut être utilisée comme un pic dans la protéine purifiée à la concentration CMC pour aider à la distribution des particules et à l’orientation préférée sur la grille pendant le processus de vitrification. De plus, la digitonine assure une pénétration efficace des anticorps dans les sections tissulaires et est compatible avec la coloration immunohistochimique (IHC). La digétonine à une concentration finale de 0,2 –0,5% en tampon est compatible avec l’IHC.

REMARQUE : Si la solution à 5% de diguonine précipite hors de la solution, réchauffez la solution à 95 °C pendant 5 minutes puis formez un vortex pour dissoudre le précipité. Refroidissez à température ambiante avant utilisation.