Invitrogen™ Colorations monomériques à la cyanine nucléique

Ces cinq colorations spectrales distinctes à la cyanine nucléique monomérique sont des sondes fluorescentes à haute sensibilité pour la coloration des acides nucléiques. Les monomères de carbocyanine ont une très forte affinité de liaison pour l’ADN ds, avec des constantes de dissociation dans la plage des micromolaires. Ces colorants comprennent chacun un seul colorant cyanine et une chaîne latérale cationique. Les monomères de carbocyanine sont spectralement analogues aux colorants cyanine dimériques correspondants; Cependant, avec seulement deux charges positives et une unité intercalante, ces colorants présentent une affinité quelque peu réduite pour les acides nucléiques par rapport aux diamères cyaninés.

Caractéristiques des colorations des acides nucléiques à la cyanine monomérique :
• Affinité élevée—, forte affinité de liaison pour l’ADN ds, avec constantes de dissociation dans la plage•
micromolaire, faible fond—de fond, fluorescence négligeable lorsqu’elle n’est pas liée aux acides nucléiques,
• augmentation—de fluorescence majeure de 20 à 1800 fois par augmentation lors de la liaison à l’ADN.•
Fluorescence —brillante, coefficients d’extinction élevés et rendements quantiques de fluorescence résultant en signaux

de fluorescence très brillants. Comme leurs homologues dimériques, ces colorants à cyanine monomérique sont généralement imperméables aux cellules viables et peuvent être utilisés comme indicateurs de cellules mortes, bien que YO-PRO-1 (Cat. Non. Y3603) peut être perçue pour des cellules apoptotiques, fournissant un indicateur pratique de l’apoptose. Les colorations à la cyanine monomérique ont une large applicabilité grâce à leur faible fond de fond et leur fluorescence vive. Ses utilisations incluent la coloration des acides nucléiques sur des supports solides, la préparation des échantillons pour l’électrophorèse en gel ou capillaire, la détection de viabilité et la contre-coloration dans des expériences à marques multiples.

Les spectres de fluorescence des cinq colorations monomériques de cyanine nucléique couvrent toute la gamme de longueurs d’onde visibles et chaque colorant diffère en coefficient d’extinction et en rendement quantique. Ces colorants peuvent aussi être utilisés avec des sources d’excitation trans- ou épi-illuminatrice ultraviolette. Les colorants TO-PRO-1, PO-PRO-1 et YO-PRO-1 présentent des pics d’excitation ultraviolette secondaires proches de 275 nm. Les colorations monomériques de cyanine nucléique présentent de grands degrés d’amélioration de fluorescence lors de la liaison à l’ADN (ou à l’ARN), variant de 400 à 1800 fois pour la “série” 1 et de 20 à 200 fois pour la “série 3. ” Par conséquent, la fluorescence du colorant non lié est négligeable dans la plupart des conditions de détection expérimentale.

Les colorations à base d’acide nucléique cyanine monomérique sont fournies en une unité de 1 mL sous forme de solutions de 1 mM dans du diméthylsulfoxyde (DMSO).

Iodure PO-PRO-1™ (435/455)
La coloration PO-PRO-1 bleue-fluorescente a des ∼maxima d’excitation/émission de 435/455 nm lorsqu’elle est liée à l’acide nucléique. Elle peut être excitée par des sources d’excitation ultraviolette (UV) et le laser He-Cd 442 nm.

Iodure YO-PRO-1™ (491/509)
La coloration YO-PRO-1 fluorescente verte a des maximums ∼d’excitation/émission de 491/509 nm lorsqu’elle est liée à l’acide nucléique. Il peut être excité par des sources d’excitation ultraviolette (UV) et le laser Ar 488 nm. La coloration YO-PRO-1 a été utilisée pour identifier les cellules apoptotiques. Les cellules apoptotiques deviennent permanentes à YO-PRO-1, mais restent imperméables au propidium iodure (Cat. Non. P3566) et d’autres taches de cellules mortes. Les cellules vivantes ne sont pas colorées avec YO-PRO-1, ce qui leur permet d’être utilisées dans des expériences ultérieures. La coloration à l’acide nucléique YO-PRO-1 est également incluse comme indicateur d’apoptose dans le Vybrant kit d’analyse d’apoptose #4 (Cat. Non. V13243) et du kit de condensation/perméabilité à membrane/apoptose des cellules mortes (Cat. No V23201).

Iodure TO-PRO-1™ (515/531)
La coloration TO-PRO-1 fluorescente verte a des maxima ∼d’excitation/émission de 515/531 nm lorsqu’elle est liée à l’acide nucléique. Il peut être excité par des sources d’excitation ultraviolette (UV) et le laser Ar 514 nm.

Iodure YO-PRO-3™ (612/631)
La coloration YO-PRO-3 fluorescente orange a des maxima ∼d’excitation/émission de 612/631 nm lorsqu’elle est liée à l’acide nucléique. Il peut être excité par le laser He-Ne de 594 nm.

Iodure TO-PRO-3™ (642/661)
La coloration TO-PRO-3 fluorescente au rouge lointain a des maxima ∼d’excitation/émission de 642/661 nm avec une fluorescence similaire à Alexa Fluor 647 ou Cy5 des colorants. La fluorescence à longue longueur d’onde de la coloration TO-PRO-3 est bien différente de celle des fluorophores couramment utilisés, tels que les Alexa Fluor colorants Oregon Green, la fluorescéine (FITC), la rhodamine (TRITC), Texas Red, la coumarine (AMCA), Marina Blue et Pacific Blue les colorants. De plus, les colorants absorbant la lumière –à longue longueur d’onde comme la coloration TO-PRO-3 ont l’avantage que leur fluorescence n’est généralement pas obscurcie par l’autofluorescence des tissus.

La coloration TO-PRO-3 est utile comme contre-coloration nucléaire et indicateur de cellules mortes en microscopie à fluorescence et cytométrie en écoulement, et fait partie des sondes à plus haute sensibilité pour la détection des acides nucléiques. Le TO-PRO-3 permet une coloration forte et sélective du noyau dans les cellules cultivées et dans les sections de paraffine. Le marquage simultané avec un colorant vert-fluorescent SYTO et une coloration TO-PRO-3 imperméméable aux cellules est fréquemment utilisé pour évaluer la viabilité cellulaire. Le TO-PRO-3 a un coefficient d’extinction beaucoup plus élevé que le propidium iodure lié à l’ADN et a été utilisé pour des applications uniques telles que la détection de cellules microbiennes et de micro-organismes dans les milieux du sol.

TO-PRO-3 est aussi disponible comme solutions stables à température ambiante, prêtes à l’emploi :
• NucRed™ Dead 647 ReadyProbes™ Reagent (Cat. Non. R37113)
• TO-PRO™ 3 Réactif prêt Flow™ (Cat. Non. R37170)