Invitrogen™ EnzChek™ Trousse d’analyse inversée Transcriptase

La EnzChek trousse d’analyse inversée Transcriptase est un test pratique, efficace et peu coûteux pour mesurer l’activité de la transcriptase inverse et dépister les inhibiteurs de la transcriptase inverse. En moins d’une heure, les échantillons peuvent être lus dans un fluoromètre ou un lecteur de microplaques avec des ensembles de filtres appropriés pour la fluorescéine (FITC), GFP ou Alexa Fluor 488.

Les caractéristiques du EnzChek kit d’analyse inversée Transcriptase incluent :

• Détecter aussi peu que 0,02 unité de transcriptase inverse du VIH-1
• Large plage dynamique de test, détection jusqu’à une plage linéaire de 50 fois
• Analyse simple à utiliser, adaptée aux applications automatisées de criblage à haut débit

Le EnzChek kit d’analyse inverse Transcriptase utilise le PicoGreen réactif, qui détecte préférentiellement les hétéroduplexes dsDNA ou ARN-ADN plutôt que les acides nucléiques simple brin ou les nucléotides libres. Dans cet essai, l’activité transcriptase inverse dans un échantillon biologique génère de longs hétéroduplexes ARN-ADN à partir d’un mélange d’un long modèle poly(A), d’un amorce oligo-dT et de dTTP. Les hétéroduplexes ARN-ADN formés sont ensuite détectés par le PicoGreen réactif.

La transcriptase inverse est une enzyme qui agit comme une ADN-polymérase dépendante de l’ARN pour synthétiser l’ADN à partir d’un modèle d’ARN. Les rétrovirus comme le VIH utilisent l’activité transcriptase inversée pour fabriquer une copie ADN de leur ARN viral à insérer dans le génome d’une cellule hôte. Les enzymes transcriptases inverses sont également utilisées dans diverses fonctions cellulaires, comme l’enzyme télomérase, qui maintient la longueur des télomères et la stabilité des chromosomes et joue un rôle dans le cancer et le vieillissement. En biologie moléculaire, la fonction transcriptase inverse est utilisée pour générer des bibliothèques d’ADN complémentaire (ADNc) à partir d’ARNm et quantifier l’expression d’ARNm par amplification en RT-PCR.

Le EnzChek kit d’analyse inverse Transcriptase offre une méthode simple pour déterminer l’activité de la transcriptase inverse, utile pour l’étude des rétrovirus et le dépistage des inhibiteurs de la transcriptase inverse, qui peuvent servir de médicaments thérapeutiques pour cibler les maladies rétrovirales. Parce que cette méthode est plus rapide et moins coûteuse que les tests isotopiques standards ou immunoanalyses, elle convient pour tester un grand nombre d’échantillons biologiques, permettant un dépistage automatisé à haut débit des inhibiteurs de transcriptase inverse.