Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR kit de test de coactivateur gamma, chèvre

Ce kit contient des anticorps anti-TPS de chèvre; les autres composants du kit sont identiques à ceux du kit A15126 :

Le LanthaScreen™ kit de test de coactivateur gamma TR-FRET PPAR offre une méthode sensible et robuste pour le dépistage à haut débit des ligands gamma PPAR potentiels en tant qu’agonistes ou antagonistes du recrutement de coactivateurs dépendants des ligands. Le kit utilise un anticorps anti-GST marqué au terbium (Tb), un peptide coactivateur marqué à la fluorescéine, ainsi qu’un domaine de liaison gamma au ligand par le récepteur activé par les proliférateurs peroxisomes (PPAR) (PPAR-gamma-LBD) qui est marqué avec du glutathione-S-transférase (GST), dans un format homogène de test mixte.

Mode
agoniste Pour exécuter le LanthaScreen™ test TR-FRET du coactivateur des récepteurs gamma activés par proliférateur de peroxysome en mode agoniste (pour identifier les composés agonistes), le PPAR gamma-LBD est ajouté aux composés de test de ligand, suivi d’un mélange du peptide fluorescéine coactivateur et de l’anticorps Tb-anti-GST. Après une période d’incubation à température ambiante, le rapport d’émission TR-FRET 520:495 est calculé et utilisé pour déterminer l’EC50 à partir d’une courbe de réponse à la dose du composé. Basée sur la biologie de l’interaction peptide-coactivateur gamma PPAR, ce ligand EC50 est une valeur composite représentant la quantité de ligand nécessaire pour se lier au récepteur, provoquer un changement conformationnel et recruter un peptide coactivateur (Figure 1).

Mode antagoniste
Lorsque le LanthaScreen™ test de coactivateur du récepteur gamma activé par proliférateur de peroxysome TR-FRET est effectué en mode antagoniste (pour identifier les composés antagonistes), le PPAR gamma-LBD est ajouté aux composés testés par ligand, suivi d’un mélange d’agoniste, de peptide coactivateur de fluores-céine et d’anticorps Tb-anti-GST. La concentration d’agoniste utilisé dans ce mode est la concentration de EC80 déterminée en effectuant d’abord le test en mode agoniste (Figure 2).

Contenu et stockage :
Le LanthaScreen™ kit de test coactivateur TR-FRET PPARγ contient la protéine gamma-LBD (GST) PPAR, un peptide coactivateur TRAP220/DRIP-2 marqué fluorescentement, un anticorps Tb-anti-GST et des tampons. Stockez les composants comme indiqué dans le protocole de test (-80 °C, -20 °C ou +4 °C).