Invitrogen™ Image-iT™ Kits de détection d’apoptose de caspases rouges et vertes en direct pour microscopie

Les Image-iT kits de détection des caspases rouges et vertes LIVE pour la microscopie utilisent une approche novatrice pour détecter les caspases actives : Les deux kits de test utilisent une méthodologie inhibiteur fluorescente des caspases (FLICA), qui est une étiquette d’affinité. Ce réactif associe une section fluorométhylcétone (FMK), qui peut réagir de façon covalente avec une cystéine, à une séquence d’acides aminés spécifique à la caspase. Différentes séquences de reconnaissance d’acides aminés sont utilisées pour détecter différentes caspases : acide valine-alanine-aspartique (DAV) pour les poly-caspases (incluant la caspase-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 et -9), et l’acide aspartique-acide glutaminique-valine-acide aspartique (DEVD) pour la caspase 3/7. Un groupe sulforhodamine (SR) ou groupe carboxyfluorescéine (FAM) est attaché en tant que rapporteur.

On pense que le FLICA réactif interagit avec le centre réactif enzymatique d’une caspase activée via la séquence de reconnaissance, puis s’attache covalentement via la moitié FMK. L’inhibiteur FLICA est permanent cellulaire et non cytotoxique. Les molécules non liées FLICA diffusent hors de la cellule et sont lavées; le signal fluorescent rouge ou vert restant mesure directement la quantité de caspase active présente au moment de l’ajout de l’inhibiteur. Les pics approximatifs d’excitation et d’émission des FLICA réactifs , iodure de propidium et Hoechst 33342 sont respectivement 488⁄ nm/530 nm, 535⁄ nm/6617 nm et 350 nm/⁄461 nm. Les réactifs de détection inclus dans les Image-iT kits de détection LIVE Red Poly Caspases, Red Caspase-3/7, Green Poly Caspases et Green Caspase-3/7 sont respectivement SR-VAD-FMK, SR-DEVD-FMK, FAM-VAD-FMK et FAM-DEVD-FMK, respectivement.