Thermo Scientific™ High-Select™ Billes magnétiques Fe-NTA

La capacité à haut débit de nos High-Select™ billes magnétiques Fe-NTA permet de traiter 96 échantillons sur une plateforme KingFisher Apex en seulement 2 heures avec seulement 30 minutes de travail direct, livrant des échantillons prêts LC/MS tout en réduisant le temps total de préparation de l’échantillon de 75% par rapport aux méthodes traditionnelles d’enrichissement. Les billes maintiennent la compatibilité avec les approches de marquage de masse en tandem, favorisant l’enrichissement des peptides marqués à la fois par TMT™ et TMTpro™. Pour une performance analytique optimale, nous recommandons les colonnes EASY-Spray C18 LC (Cat. Non. ES903) pour l’analyse spectrométrique de masse à haute résolution, tandis que les kits d’enrichissement de phosphopeptides magnétiques Fe-NTA préformulés High-Select™ (Cat. Non. A40004768 et A40004771) offrent des systèmes de tampon optimisés pour une commodité accrue des flux de travail.

Caractéristiques

• Performance de haute spécificité : Atteindre >une sélectivité de 90% pour la récupération des phosphopeptides
• Efficacité supérieure de récupération : Enrichir plus de phosphopeptides totaux et uniques que d’autres résines disponibles dans le commerce
• Couverture complète de la phosphorylation : Récupérer des peptides avec un ou plusieurs sites de phosphorylation
• Compatibilité évolutive des flux de travail : Compatible avec les systèmes de traitement automatisés, incluant l’intégration avec KingFisher™ des processeurs à particules magnétiques pour des applications à haut débit

La technologie superparamagnétique avancée assure une performance et une uniformité supérieures

Les High-Select™ billes magnétiques Fe-NTA utilisent une technologie superparamagnétique de pointe non agrégée (Fe_{3O 4}) qui offre une uniformité exceptionnelle dans toutes les applications. Cette composition avancée de billes offre une performance constante et fiable tant dans les protocoles de purification manuels que dans les systèmes automatisés, incluant la compatibilité avec des instruments sophistiqués tels que le Thermo Scientific™ KingFisher™ processeur de particules magnétiques Apex. Les propriétés superparamagnétiques de ces billes à base de magnétite assurent une séparation magnétique rapide tout en maintenant l’intégrité de l’échantillon tout au long du processus d’enrichissement.

La conception simplifiée des protocoles optimise la récupération des phosphopeptides

Les High-Select™ billes magnétiques Fe-NTA suivent un flux de travail systématique qui maximise l’efficacité de capture des phosphopeptides. Le protocole commence par la préparation standard d’échantillons de peptides comprenant la lyse, la réduction, l’alkylation et la digestion, suivie d’étapes essentielles de nettoyage et SpeedVac de concentration peptidique. Les formulations tampons publiées peuvent être utilisées pour reconstituer des échantillons de peptides avant de les combiner avec les billes pour une période d’incubation de 30 minutes à température ambiante avec agitation continue. Le processus d’enrichissement se termine par la collecte magnétique des biles, le retrait des peptides non liés, l’exécution de plusieurs étapes de lavage strictes et l’élution finale des phosphopeptides enrichis.

Solution critique aux défis de la spectrométrie de masse en phosphoprotéomique

La spectrométrie de masse (EM) représente la technique analytique de référence pour identifier les sites de phosphorylation des protéines et quantifier les changements dynamiques de phosphorylation dans les systèmes biologiques. Cependant, l’analyse en EM de la phosphorylation des protéines présente des défis techniques importants qui nécessitent des stratégies d’enrichissement spécialisées. Les phosphopeptides présentent une stœchiométrie caractéristiquement faible dans les mélanges protéiques complexes, présentent une hydrophilicité élevée qui affecte le comportement chromatographique, souffrent d’une faible efficacité d’ionisation lors de l’analyse de la SEP, et présentent souvent des schémas de fragmentation incomplets qui compliquent l’interprétation spectrale. L’abondance relative intrinsèquement faible des modifications de phosphorylation dans les échantillons complexes de protéines fait de l’enrichissement un prérequis essentiel pour une analyse réussie des phosphopeptides basés sur la SEP et des résultats fiables en recherche en phosphoprotéomique.