Invitrogen™ GeneArt™ Kit de clonage et d’assemblage Seamless PLUS

Comme notre kit de clonage et d’assemblage sans couture de première génération, GeneArt™ le kit de clonage et d’assemblage Seamless PLUS est le kit complet pour le clonage simultané et directionnel de 1 à 4 fragments PCR, consistant en n’importe quelle séquence, dans n’importe quel vecteur linéarisé, en une seule réaction de 30 minutes ou moins, à température ambiante. Cependant, Seamless PLUS offre plusieurs avantages par rapport aux kits précédents :

• Efficacité accrue : Option pré-clonage pour les gros fragments afin d’augmenter l’efficacité
• du clonage Grandes constructions : créez des constructions jusqu’à 40 kb
• Polyvalence : vecteur conjugatif à grande capacité et large portée qui se réplique chez la plupart des bactéries

à Gram négatif. Les améliorations ci-dessus sont combinées à ces avantages clés partagés par tous GeneArt™ les kits de clonage et d’assemblage sans couture :

• Speed et Ease—clonent jusqu’à 4 fragments d’ADN, avec la séquence de votre choix, simultanément dans un seul vecteur; aucun site de restriction de digestion, ligature ou recombinaison ne nécessite
• Précision et Efficacité—conçues pour vous permettre de cloner ce que vous voulez, où vous voulez, dans l’orientation souhaitée, et obtenir jusqu’à 90% de clones corrects sans aucune séquence supplémentaire
•. Free Tools—conçoit votre construction finale et vos oligos d’ADN in silico en utilisant notre offre gratuite outil web qui vous guide étape par étape dans votre projet
• Flexibilité—vectorielle : utilisez notre vecteur linéaire ou un vecteur de votre
choix•. Diverses applications —simplifient de nombreuses techniques de biologie synthétique et moléculaire grâce à la combinaison, l’addition, la suppression ou l’échange rapide de segments d’ADN.

Pour le clonage de plus de 4 fragments d’ADN ou pour des molécules finales supérieures à 110 Ko, veuillez considérer le système d’assemblage GeneArt™ génétique de haut ordre.

Création
GeneArt™ de clones simple et rapide Le clonage PLUS sans couture est un processus simple en deux étapes, consistant en un assemblage in vitro suivi d’une transformation en E. coli compétente pour le T1R Shot™ DH10B™ SA. Le kit utilise un mélange enzymatique/tampon propriétaire pour assembler des fragments d’ADN avec une homologie terminale partagée sans séquences ou cicatrices supplémentaires dans la construction finale (“sans couture”). L’homologie terminale est facilement intégrée par amplification PCR avec des oligos d’ADN personnalisés conçus à l’aide de notre outil web gratuit.

Efficacité, flexibilité et précision
du clonageAvec le kit de clonage et d’assemblage GeneArt™ Seamless PLUS, les principaux facteurs influençant l’efficacité du clonage sont la taille des fragments d’ADN (100 pb à 10 Ko), la taille totale de la molécule finale (≤ 40 Ko), ainsi que la qualité et la spécificité de chaque fragment.

Rendements typiques de clonage pour différents nombres de fragments :

• >95% pour 4 fragments, 5 Ko chacun
• >90% pour 4 fragments, 10 Ko pour chaque

Clonage le succès du clonage est indépendant de la séquence d’insertion et du type de vecteur, ce qui vous permet de concevoir et d’ajouter presque n’importe quelle séquence désirée, ou combinaison de séquences, à n’importe quel plasmide tant qu’il peut être linéarisé soit par digestion enzymatique de restriction, soit par PCR. Les clones circularisés obtenus à partir de la réaction ne contiennent que la séquence de votre vecteur original, des insertions et des homologies désignées, sans insertion nucléotidique superflue.

Soutien de conception in silico
Une étape clé du GeneArt™ clonage PLUS sans couture est la conception correcte des fragments et oligos avec l’homologie et l’espacement appropriés pour aider à assurer un assemblage réussi de votre clone. Nous offrons un outil en ligne gratuit, le GeneArt™ Design Tool for Seamless or High-Order Assembly and Mutagenesis, pour vous aider à concevoir votre expérience in silico. L’outil vérifie la compatibilité de la conception expérimentale avec les spécifications du produit, conçoit des oligos d’ADN avec homologie terminale pour l’amplification PCR des différents éléments à cloner, et présente à l’utilisateur une représentation graphique du vecteur, ainsi qu’une séquence annotée téléchargeable au GenBank format compatible avec le logiciel Vector NTI™ .

Applications
Le kit de clonage et d’assemblage GeneArt™ Seamless PLUS est conçu pour permettre le clonage et l’assemblage de l’ADN dans un large éventail d’applications en biologie moléculaire et en biologie synthétique, entre autres. Le produit permet la création de vecteurs d’expression modulaires, avec des pièces interchangeables, et peut être utilisé pour effectuer une variété de tâches qui impliqueraient autrement plusieurs étapes. Utilisez le kit pour construire des protéines de fusion; supprimer, remplacer ou ajouter des éléments d’ADN tels que des sites de restriction dans un vecteur existant; et exécutent de nombreuses autres techniques nécessitant la manipulation de séquences génétiques.