Thermo Scientific™ PagI (BspHI) (10 U/μL)

5'... T▵C A T G A... 3'

3'... A G T A C▵T... 5'

Conditions pour une activité à 100% :

• 1X Tampon O : 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 à 37 °C), 10 mM_{MgCl 2}, 100 mM NaCl et 0,1 mg/mL de BSA
• Incubez à 37 °C

Tampon de stockage :

• PagI est fourni en : 10 mM de Tris-HCl (pH 7,4 à 25 °C), 100 mM de NaCl, 1 mM de DTT, 1 mM d’EDTA, 0,2 mg/mL de BSA et 50% (v/v) de glycérol

Ligature et reclivage :

• Après une surdigestion multipliée par PagI, plus de 95% des fragments d’ADN peuvent être ligés et recoupés

Effets de la méthylation :

• Barrage : peut se chevaucher —un clivage altéré
• Dcm : jamais de —chevauchement sans effet
• CpG : jamais de —chevauchement sans effet
• EcoKI : jamais de chevauchement —sans effet
• EcoBI : peut se chevaucher —un clivage altéré

Digestion de l’ADN incorporé dans l’agarose :

• Un minimum de 5 unités de l’enzyme est nécessaire pour la digestion complète de 1 μg d’ADN lambda incrusté dans l’agarose en 16 heures

Objectifs compatibles :

• AflIII, PscI, DsaI, Eco130I, NcoI

Remarque :

Un faible taux de sel, des concentrations élevées de glycérol (>5%), un pH >8,0 ou un excès important d’enzymes peuvent entraîner une activité d’étoile. Le clivage PagI est altéré par la méthylation du digue qui se chevauche. Pour éviter la méthylation par barrage , utilisez une souche de barrage et DCM comme GM2163 (#M0099).