Thermo Scientific™ Eco57I (AcuI) (5 U/μL)

5'... C T G A A G (N₎₁₆▵... 3'

3'... G A C T T C (N₎₁₄▵... 5'

Conditions pour une activité à 100% :

• [1x tampon G] + SAM : [10 mM Tris-HCl (pH 7,5 à 37 °C), 10 mM_{MgCl 2}, 50 mM NaCl et 0,1 mg/mL de BSA] + 0,01 mM de S-adénosylméthionine
• Incubez à 37 °C

Tampon de stockage :

• L’Eco57I est fourni en : 10 mM de phosphate de potassium (pH 7,4 à 25 °C), 100 mM de NaCl, 1 mM d’EDTA, 1 mM de DTT et 50% (v/v) de glycérol

Ligature et reclivage :

• Après une surdigestion de 10 fois avec l’Eco57I, environ 70% des fragments d’ADN peuvent être ligués, mais aucun de ceux-ci ne peut être recoupé en raison de la méthylation de la séquence de reconnaissance par cette enzyme

Effets de la méthylation :

• Dam : ne se chevauche jamais — aucun effet
• Dcm : jamais de chevauchement — aucun effet
• CpG : ne se chevauche jamais — aucun effet
• EcoKI : ne jamais se chevaucher — aucun effet
• EcoBI : effet de chevauchement possible non déterminé

Remarque :

L’Eco57I nécessite seulement Mg² + pour son activité, mais il est stimulé par la S-adénosylméthionine. 0,01 mM de S-adénosylméthionine multiplie par 100 l’activité de l’Eco57I. Cela dit, il est difficile d’obtenir un clivage complet de certains substrats avec Eco57I. La concentration d’Eco57I est déterminée par le niveau maximal de clivage atteint lorsqu’aucun changement dans le schéma de fragmentation n’est observé avec une augmentation supplémentaire des enzymes. Un faible taux de sel, des concentrations élevées de glycérol (>5%), un pH >8,0 ou un excès important d’enzymes peuvent entraîner une activité d’étoile. L’Eco57I pourrait rester associé à l’ADN clivé. Cela peut provoquer un décalage de la bande d’ADN lors de l’électrophorèse. Pour éviter des motifs atypiques de bandes d’ADN, utilisez la solution SDS 6X DNA Loading Dye & pour la préparation de l’échantillon ou chauffez l’ADN digéré en présence de SDS avant l’électrophorèse.