Thermo Scientific™ Eco31I (BsaI) (10 U/μL)

5'... G G T C T C (N₎₁▵... 3'

3'... C C A G A G (N₎₅▵... 5'

Conditions pour une activité à 100% :

• 1x Tampon G : 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 à 37 °C), 10 mM_{MgCl 2}, 50 mM NaCl et 0,1 mg/mL de BSA
• Incubez à 37 °C

Tampon de stockage :

• L’Eco31I est fourni en : 10 mM de Tris-HCl (pH 7,5 à 25 °C), 200 mM de KCl, 1 mM de DTT, 0,1 mM d’EDTA, 0,2 mg/mL de BSA et 50% (v/v) de glycérol

Ligature et reclivage :

• Après une surdigestion multipliée par 50 avec l’Eco31I, plus de 95% des fragments d’ADN peuvent être ligués et recoupés

Effets de la méthylation :

• Dam : ne se chevauche jamais — aucun effet
• Dcm : peut être altérée en clivage
• CpG : peut être altéré par le clivage
• EcoKI : ne jamais se chevaucher — aucun effet
• EcoBI : effet de chevauchement possible non déterminé

Digestion de l’ADN incorporé dans l’agarose :

• Un minimum de 5U de l’enzyme est requis pour la digestion complète de 1 μg d’ADN lambda incrusté dans l’agarose en 16 heures

Remarque :

Analysé à l’aide de l’ADN lambda (dcm-) (#SD0021), comme l’un des deux sites de reconnaissance Eco31I dans l’ADN lambda, il est difficile de cliver. Le clivage Eco31I est altéré par la méthylationdcm chevauchée. Pour éviter la méthylationde DCM , utilisez une souchede barrage, DCM comme GM2163 (#M0099). Un faible taux de sel, des concentrations élevées de glycérol (>5%), un pH >8,0 ou un excès important d’enzymes peuvent entraîner une activité d’étoile. L'Eco31I se décroche en aval de son site de reconnaissance et peut générer n'importe quel surplomb de 4 bases de 5 pieds désiré. Cette fonctionnalité est utile pour le clonage direct de produits PCR.