Thermo Scientific™ CloneJET Trousse de clonage PCR

De plus, tout autre fragment d’ADN émoussé ou collant peut être cloné. Le kit est idéal pour les fragments d’ADN phosphorylés ou non phosphorylés. La ligation dans le vecteur de sélection positif inclus ne prend que 5 minutes et produit plus de 99% de clones recombinants. Les produits PCR à extrémité émoussée générés avec une enzyme de relecture (par exemple, Pfu polymérase) sont directement ligés dans le vecteur de clonage. Les produits PCR générés soit par des ADN polymérases sans correction (par exemple, polymérase Taq ), soit par des mélanges d’ADN polymérases sont émoussés avant la ligation en 5 minutes avec l’enzyme d’atténuation à ADN thermostable fournie avec le kit. Toutes les souches courantes d’E. coli en laboratoire peuvent être transformées directement avec le produit de ligature.

Le kit contient un nouveau vecteur de clonage à sélection positive prêt à l’emploi, pJET1.2/blunt. Le vecteur contient un gène enzymatique de restriction létale qui est perturbé par la ligation d’un insert d’ADN dans le site de clonage. En conséquence, seules les cellules bactériennes dotées de plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules vectorielles recirculées pJET1.2/contondantes dépourvues d’insert expriment une enzyme de restriction létale qui tue la cellule hôte d’E. coli après transformation. Cette sélection positive accélère considérablement le processus de dépistage des colonies et élimine les coûts supplémentaires nécessaires à la sélection bleu/blanc. Pour faciliter la cartographie et la manipulation de l’insert, le site de clonage multiple vectoriel pJET1.2/blunt contient deux séquences de reconnaissance BglII qui encadrent le site d’insertion. De plus, le vecteur contient un promoteur T7 pour la transcription in vitro et in vivo ainsi que pour le séquençage de l’insert.

• Clonage PCR rapide—en seulement 5 minutes
• Efficacité— maximale >99% des clones positifs
• Aucun vecteur de sélection positif de fond—de clonage
• Polyvalent—, idéal pour le clonage à extrémité émoussée ou collante
• Un écran bleu/blanc coûteux et non coûteux—

Recommandé dans les domaines suivants :

Clonage de produits PCR à extrémité émoussée ou à queue 3'-dA jusqu'à 10 kob; Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction; Séquençage de l’ADN cloné; Transcription in vitro et in vivo des inserts clonés du promoteur T7

Remarque :

Avant l’électroporation, purifiez toujours le mélange de ligature en colonne à l’aide d’un GeneJET kit de purification PCR, †K0701 ou d’un kit d’extrait de chloroforme. L’électroporation est inhibée par la présence de protéines et de sels dans le mélange.