Thermo Scientific™ BplI (5 U/μL)

5'... ▵ ₈(N) G A G (N₎₅ C T C (N₎₁₃▵... 3'

3'... ▵₁₃(N) C T C (N₎₅ G A G (N₎₈ ▵... 5'

Conditions pour une activité à 100% :

• [1X Buffer Tango™] + SAM : [33 mM Tris-acétate (pH 7,9 à 37 °C), 10 mM d’acétate de Mg, 66 mM de K-acétate et 0,1 mg/mL de BSA] + 0,05 mM de S-adénosylméthionine
• Incubez à 37 °C

Tampon de stockage :

• Le BPLI est fourni en : 10 mM de Tris-HCl (pH 7,4 à 25 °C), 100 mM de KCl, 1 mM de DTT, 1 mM d’EDTA, 0,2 mg/mL de BSA et 50% (v/v) de glycérol

Ligature et reclivage :

• Après une surdigestion de 10 fois avec BplI, plus de 70% des fragments d’ADN peuvent être ligés, mais aucun de ceux-ci ne peut être recoupé en raison de la méthylation de la séquence de reconnaissance par cette enzyme

Effets de la méthylation :

• Dam : ne se chevauche — jamais, aucun effet
• Dcm : jamais de — chevauchement sans effet
• CpG : peut se chevaucher — sans effet
• EcoKI : jamais de chevauchement — sans effet
• EcoBI : jamais de chevauchement — sans effet

Digestion de l’ADN incorporé dans l’agarose :

• Un minimum de 10 unités de cette enzyme est nécessaire pour la digestion complète de 1 μg d’ADN lambda incorporé dans l’agarose en 16 heures

Remarque :

Le BPLI nécessite seulement Mg² + pour son activité, mais il est stimulé par la S-adénosylméthionine. 0,05 mM de S-adénosylméthionine donne plus de 100 fois d’augmentation de l’activité BplI. Cela dit, un clivage complet de certains substrats avec BplI est difficile à obtenir. La concentration de BplI est déterminée par le niveau maximal de clivage atteint lorsqu’aucun changement dans le schéma de fragmentation n’est observé avec une augmentation supplémentaire des enzymes.