Invitrogen™ Dynabeads™ mRNA DIRECT™ Kit de purification

Le Dynabeads™ mRNA DIRECT™ kit est conçu pour l’isolement simple et rapide de l’ARNm polyadénylé (polyA) pur et intact directement à partir du lysat brut des cellules et tissus animaux et végétaux. L’ARNm isolé convient à toutes les applications en aval.

Avantages du Dynabeads mRNA DIRECT kit :
• Une procédure rapide—de 15 minutes donne un ARNm•
pur et intact. L'isolation—très pure de l'ARNm est le meilleur choix en amont de la synthèse
• d'ADNc. L'isolement—sensible d'ARNm permet la synthèse d'ADNc et la construction de bibliothèques d'ADNc à partir d'échantillons de départ ultra-petits (permet la construction d'une bibliothèque d'ADNc à partir d'une seule cellule).

Aperçu
du système. Le protocole d'isolement repose sur l'appariement de bases entre les résidus polyA à l'extrémité 3' de la plupart des ARNm, et les résidus oligo-(dT)₂₅ couplés covalentement à la surface du Dynabeads. D’autres espèces d’ARN dépourvues de queue polyA ne s’hybrident pas avec les billes et sont facilement emportées. L’ARN ribosomique, l’ADN, les protéines et les petites molécules d’ARN (comme l’ARN de transfert, le microARN et le petit ARN nucléolaire) ne se lient pas aux billes et sont rejetés. Les agents inhibiteurs de RNase dans le tampon de lyse/liaison, combinés à des conditions strictes d’hybridation et de lavage, assurent l’isolement de l’ARNm pur et intact à partir d’échantillons bruts riches en RNase, sans recourir à des agents chaotropes forts. Les billes de purification d’ARNm ciblent spécifiquement et capturent le transcriptome d’ARNm à partir d’une très grande variété d’échantillons de départ bruts (voir protocole). 1 mg de Dynabeads Oligo billes (dT₎₂₅ (200 μL) se lie jusqu’à 2 μg d’ARNm. Une cellule typique de mammifère contient environ 10 –à 30 pg d’ARN total, dont 15 –% est un ARNm.