Invitrogen™ Colorations DAPI et Hoechst acides nucléiques

Les poudres de qualité Hoechst FluoroPure™ et DAPI sont fabriquées selon des procédés de purification rigoureux afin de minimiser les impuretés susceptibles d’interférer avec l’imagerie à fluorescence. Cela garantit que le DAPI fournit Hoechst des résultats fiables et constants avec un minimum de bruit de fond. La >pureté de 98% des FluoroPure réactifs de qualité les rend particulièrement adaptés à des applications exigeantes telles que la microscopie à super-résolution et l’imagerie de cellules vivantes, où une visualisation précise et précise de l’ADN est essentielle.

DAPI (4',6-Diamidino-2-Phénylindole) :

DAPI 4',6-diamidino-2-phénylindole est une sonde fluorescente bleue qui fluoresce vivement lorsqu'elle se lie sélectivement au sillon mineur de l'ADN double brin, où sa fluorescence est environ 20 fois supérieure à celle à l'état non lié. Sa sélectivité pour l’ADN et sa haute perméabilité cellulaire permettent une coloration efficace des noyaux avec peu de fond du cytoplasme et un contraste efficace dans la coloration IHC ainsi que l’imagerie tissulaire transcriptomique spatiale et protéomique. Le DAPI est une contre-coloration nucléaire classique pour la microscopie à immunofluorescence, ainsi qu’un composant important des méthodes de dépistage à haute teneur nécessitant une quantification cellulaire du contenu d’ADN et une segmentation (em/ex 341/452 nm).

Le DAPI, en tant que poudre de dilactate, est plus soluble dans l’eau que le sel de dihydrochlorure, et donc un meilleur choix pour préparer des solutions de bouillon dans l’eau.

Pour obtenir une solution DAPI de 5 mg/mL (14,3 mM pour le dihydrochlorure ou 10,9 mM pour le dilactate), dissoudez le contenu d’un flacon (10 mg) dans 2 mL d’eau déionisée (dH₂O) ou de diméthylformamide (DMF). Le dihydrochlorure DAPI, moins soluble dans l’eau, peut mettre un certain temps à se dissoudre complètement dans l’eau et une sonation peut être nécessaire.

Note : Aucun de ces dérivés DAPI n’est très soluble en PBS pour la solution stock.

Diluez la solution DAPI d’origine 1:5000 (ou 1:1000 pour le DAPI 62248 à 1 mg/mL) dans de l’eau ultrapure ou du PBS (1 μg/mL de DAPI). Filtrez la solution de travail pour éliminer les agrégats de colorant qui peuvent produire un signal poncé.

Hoechst 33342, Trihydrochlorure, Trihydrate et Hoechst 33258, Pentahydrate (bis-Benzimide) :

Nos Hoechst colorants sont des fluorophores renommés, largement utilisés pour la coloration de l’ADN, tant dans les cellules vivantes que dans les cellules fixes. Grâce à leur affinité exceptionnelle et leur spécificité envers l’ADN, ces colorants servent d’excellents agents de ciblage pouvant être conjugués à diverses molécules, leur permettant d’être attachés à l’ADN.

Les Hoechst colorants incluent Hoechst généralement 33258, Hoechst 33342 et Hoechst 34580. Développés par la société Hoechst allemande AG au début des années 1970, ces colorants bisbenzimides sont largement utilisés pour la coloration de l’ADN depuis lors.

Excités par la lumière UV, Hoechst les colorants émettent un large spectre de lumière bleue. Lors de la liaison à l’ADN, leur fluorescence augmente d’environ 30 fois, assurant un fort rapport signal/bruit. Cette augmentation de fluorescence résulte d’une relaxation rotationnelle supprimée et d’une réduction de l’hydratation lors de la liaison à l’ADN (em/ex 360/460 nm).

Hoechst les colorants ne sont pas intercalants, se liant spécifiquement à la petite rainure de l’ADN dans les régions riches en T. – Ce mécanisme de liaison unique permet une coloration de l’ADN précise et fiable.

Que vous travailliez avec des cellules vivantes ou fixes, nos Hoechst colorants sont compatibles avec les applications en immunohistochimie. De plus, la liaison de Hoechst 33342 à l’ADN induit une cytotoxicité minimale, assurant la viabilité de vos cellules.

Bien que les trois Hoechst colorants aient des applications similaires, ils présentent de légères différences dans leurs propriétés. Hoechst Le 33342, par exemple, est nettement plus perméable aux cellules grâce à l’ajout d’un groupe éthyle lipophile, ce qui en fait le choix privilégié pour la coloration cellulaire vivante. En revanche, Hoechst le 34580, avec son groupe diméthylamine au lieu du phénol, présente un maximum d’émission décalé à 490 nm, comparativement aux 461 nm de Hoechst 33258 et Hoechst 33342.

Hoechst 33258, Pentahydrate est aussi connu sous le nom de bis-Benzimide.

Application des colorants DAPI et Hoechst fluorescents :

• La coloration—de l’ADN est couramment utilisée pour la coloration de l’ADN en microscopie à fluorescence et en cytométrie en flux. Elle se lie à la petite rainure de l’ADN double brin et émet une fluorescence bleue lorsqu’elle est excitée par la lumière ultraviolette (UV). Cela permet aux chercheurs de visualiser et de quantifier l’ADN dans les cellules, les tissus et les noyaux.
• L’analyse—du cycle cellulaire est largement utilisée pour analyser le cycle cellulaire. En colorant les cellules avec ce colorant et en utilisant la cytométrie en flux ou la microscopie à fluorescence, les chercheurs peuvent identifier et quantifier différentes phases du cycle cellulaire, telles que les phases G1, S et G2/M. Cette analyse fournit des informations sur la prolifération cellulaire, la progression du cycle cellulaire et les anomalies du cycle cellulaire.
• La morphologie nucléaire et l’organisation—de la chromatine étudient la morphologie nucléaire et l’organisation de la chromatine. En visualisant l’ADN à l’intérieur du noyau, les chercheurs peuvent étudier les changements de taille, de forme et de condensation de la chromatine nucléaire, qui sont associés à divers processus et conditions cellulaires.