Applied Biosystems™ PureQuant™ Essai Treg

Les tests sont TaqMan basés sur la qPCR et mesurent la méthylation génomique de l’ADN à des sites spécifiques qui servent d’identifiant unique. Les tests comprennent des normes et des contrôles, et chaque plaque de 96 puits peut contenir jusqu’à sept échantillons d’essai. Les résultats sont fournis en pourcentage du type de cellule cible sur le total des cellules d’entrée à l’aide d’un outil d’analyse gratuit.

Le PureQuant™ test Treg utilise un site déméthylé spécifique dans le gène du facteur de transcription FOXP3 pour identifier positivement les lymphocytes T régulateurs. Ce site spécifique permet de distinguer les lymphocytes T régulateurs des cellules 

T CD4+ FOXP3+ activées. Les avantages incluent :

• Performance éprouvée — la technologie de base est utilisée pour l’identification et la quantification des types de cellules immunitaires depuis plus de dix ans
• La méthode qPCR facilement standardisable permet des résultats cohérents entre plusieurs utilisateurs, instruments et sites
• Facilite les dépôts réglementaires — dossier de soutien réglementaire fourni sur demande; les spécifications de performance établies selon les lignes directrices de l’ICHQ2(R1)
• Flexibilité de planification ― le test peut être réalisé avec des cellules/ADNg frais ou congelés

Les tests incluent tous les réactifs, normes et contrôles nécessaires pour exécuter le test. Les composantes spécifiques incluent :

• Étalonneur :  Le calibrateur à base de plasmides abrite les régions cibles génomiques en rapports équimolaires et inclut le GAPDH. Soumis à une conversion de bisulfite suivie d’une estimation du nombre de copies via la courbe standard qPCR. Permet d’estimer le facteur d’efficacité des bisulfites spécifique à l’essai : le rapport entre les nombres de copies TpG/GAPDH mesuré à partir du même plasmide.
• Référence : vérifie la performance de l’essai. Consiste en de l’ADN génomique extrait du sang humain de donneurs en bonne santé. Les valeurs de référence représentent la plage attendue du type de cellule cible. Par exemple, les cellules CD8+ sont généralement plus abondantes que les cellules Treg ou Th17.
• Normes : déterminer le numéro de copie inconnu. Consiste en six dilutions couvrant une plage dynamique linéaire de 4 log (30-31 250 exemplaires). Les nombres absolus de copies peuvent être déterminés de manière fiable en utilisant la pente et l’interception des courbes standard respectives.

Ce produit est fabriqué sur un site doté d’un système de gestion de la qualité certifié ISO9001.