Thermo Scientific™ CloneJET™ Kit de clonage PCR avec DH10B cellules compétentes

• Ce paquet comprend le CloneJET kit de clonage PCR (20 ou 40 réactions) et DH10B des cellules compétentes, optimisées pour une utilisation avec le kit et pouvant être transformées directement avec le produit de ligature

CloneJET Kit
de clonage PCR Un système avancé de sélection positive pour le clonage à haute efficacité des produits PCR générés avec n’importe quelle polymérase à ADN thermostable. Tout fragment d’ADN émoussé ou collant peut être cloné. Le kit fonctionne bien avec des fragments d’ADN phosphorylés et non phosphorylés. La ligation dans le vecteur de sélection positive inclus ne prend que cinq minutes, produisant plus de 99% de clones recombinants. Les produits PCR à extrémité émoussée générés avec une enzyme de relecture sont directement ligés dans le vecteur de clonage.

Les produits de PCR générés soit par des ADN polymérases sans correction, soit par des mélanges d’ADN polymérases doivent être émoussés avant la ligature lors d’une réaction de cinq minutes avec l’enzyme d’atténuation de l’ADN thermostable fournie avec le kit. DH10B Les cellules compétentes sont optimisées pour être utilisées avec ce kit et peuvent être transformées directement avec le produit de ligatura.

Contient le nouveau vecteur de clonage à sélection positive prêt à l’emploi pJET1.2/blunt. Le vecteur contient un gène enzymatique de restriction létale qui est perturbé par la ligation d’un insert d’ADN dans le site de clonage. En conséquence, seules les cellules bactériennes dotées de plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules vectorielles pJET1.2/contondantes recirculées sans insert expriment une enzyme de restriction létale, qui tue la cellule hôte d’E. coli après transformation. Cette sélection positive accélère considérablement le processus de dépistage des colonies et élimine les coûts supplémentaires nécessaires à la sélection bleu/blanc.

• Rapide - Clonage PCR en seulement cinq minutes
• Efficacité maximale - 99% des clones positifs
• Pas de fond de clonage - vecteur de sélection positif
• Polyvalent - idéal pour le clonage à extrémité émoussée ou à extrémité collante
• Économique – pas de chers écrans bleu/blanc

Les applications incluent :

• Clonage de produits PCR à extrémité émoussée ou à queue 3' dA jusqu'à 10 ko
• Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction
• Séquençage de l’ADN cloné
• transcription in vitro et in vivo des inserts clonés du promoteur T7

DH10B Cellules compétentes
Cellules d’E. coli à haute efficacité et chimiquement compétentes. Cette DH10B souche convient au clonage d’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladénine, permettant ainsi de cloner efficacement l’ADN génomique procaryote et eucaryote. Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc utilisant des vecteurs dérivés des plasmides. Génotype : F – mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ – rpsL(StrR) nupG.

• Haute efficacité de transformation : >1x109 cfu/μg d’ADN pUC19
• Adapté aux applications de clonage routinières et à haut débit
• Deux réactions pratiques par emballage de flacon
• S.O.C. Milieu de croissance inclus