Invitrogen™ Click-iT™ Essais d’imagerie TUNEL Alexa Fluor pour microscopie & HCS

L’apoptose est caractérisée par des processus cellulaires définis, incluant l’arrondissement cellulaire, le blebblage et la fragmentation de l’ADN. Le test TUNEL est la méthode analytique la plus utilisée pour détecter l’ADN fragmenté dans les cellules apoptotiques dans des échantillons de tissus, en commençant par l’incorporation de dUTP modifiés aux extrémités 3'-OH de l’ADN fragmenté. Les dUTP incluent souvent une molécule de fluorophore. En raison de la taille du fluorophore, les dUTP modifiés peuvent présenter des taux d’incorporation inférieurs aux attentes, ce qui affecte négativement la sensibilité du test TUNEL. Très souvent, les fluorophores utilisés dans les kits de test TUNEL actuellement disponibles présentent des problèmes de photoblanchiment et de chevauchement spectral fluorescent, qui réduisent tous deux la sensibilité et la capacité à multiplexer ces tests.

Le Click-iT test Plus TUNEL a été développé pour traiter ces problèmes et repose sur une réaction catalysée par le cuivre (I) (c’est-à-dire par clic) entre une azide et un alkyne. La petite taille de l’azide Alexa Fluor , qui a un poids moléculaire d’environ 1 kDa, permet d’incorporer plus facilement le Alexa Fluor colorant 488, 594 ou 647 dans des échantillons complexes, comparativement aux anticorps plus gros (MW ˜100 000 Da). Cela permet une fixation légère ou perméabilisation et un délai de réponse plus rapide (environ deux heures) et permet la détection d’un pourcentage plus élevé de cellules apoptotiques dans des conditions identiques. En raison de ses conditions de réaction douces, le Click-iT test Plus TUNEL peut aussi être multiplexé avec des protéines fluorescentes ou des colorants.

Les Click-iT tests d’imagerie TUNEL Alexa Fluor contiennent tous les composants nécessaires pour détecter avec précision et fiabilité l’apoptose dans les cellules adhérentes cultivées sur des cache-lames ou des microplaques à 96 puits, et ils incluent aussi la DNase I pour générer des ruptures de brin pour le contrôle positif.