Invitrogen™ Click-iT™ Plus des kits de test TUNEL pour la détection in situ de l’apoptose

Les Click-iT tests plus TUNEL Alexa Fluor 488, 594 et 647 pour la détection in situ de l’apoptose peuvent détecter des cellules apoptotiques dans des échantillons de tissus et de cellules cultivées grâce à l’incorporation d’une petite moitié de marquage très spécifique et d’un colorant fluorescent brillant. Après l’incorporation de la moitié de marquage dans les fragments d’ADN, la détection est réalisée par une réaction catalysée de « clic » en utilisant des conditions suffisamment douces pour préserver le signal fluorescent émis par GFP ou RFP.

Parmi les autres avantages du Click-iT test Plus TUNEL pour la détection in situ de l’apoptose incluent :
• Optimisé pour la détection de cellules apoptotiques dans des échantillons de tissu ou de cellule, Multiplex a permis
—de travailler avec des colorants fluorescents ou des protéines telles que GFP et RFP
• Amélioration de—l’essai TUNEL Meilleure intégration du marquage grâce à une petite moitié
• réactive Le signal—apoptotique brillant utilise Alexa Fluor des colorants, ce qui donne un signal
• fluorescent stable et non photoblanchant Flexibilité—: le test peut être configuré pour tester 150 –échantillons à la fois

• La fragmentation de l’ADN cellulaire est une caractéristique de l’apoptose. Le test TUNEL est la méthode la plus utilisée pour détecter l’ADN fragmenté dans les cellules ou échantillons de tissus apoptotiques. Le test TUNEL commence par l’incorporation de dUTP modifié à l’extrémité 3'-OH de l’ADN fragmenté. La modification dUTP consiste souvent à ajouter un fluorophore. En raison de la taille du fluorophore, le dUTP modifié peut afficher des taux d’incorporation inférieurs aux attentes, ce qui peut affecter la sensibilité du test TUNEL. De plus, de nombreux fluorophores utilisés dans les kits de test TUNEL actuellement disponibles souffrent de photoblanchiment et de problèmes de chevauchement spectral fluorescent, qui réduisent tous deux la sensibilité et la capacité de multiplexer le test.

Le Click-iT test Plus TUNEL a été développé pour répondre à ces problèmes. Le test utilise dUTP modifié avec un groupe alkyne (un petit groupe fonctionnel bio-orthogonal), permettant d’incorporer plus facilement le nucléotide. Après l’incorporation, une réaction de clic très spécifique entre le groupe alkyne et un Alexa Fluor colorant fluorescent picolyl azide, suivie de la détection subséquente de ce colorant, aboutit à un test sensible et spécifique pour la détection de cellules ou d’échantillons de tissu apoptotiques. En raison de ses conditions de réaction douces, le Click-iT test Plus TUNEL permet le multiplexage avec des protéines ou colorants fluorescents.

Le Click-iT test Plus TUNEL a été validé avec plusieurs types de tissus intégrés à la paraffine fixée au formol. Dans tous les cas, sa capacité à multiplexer avec des protéines et colorants fluorescents a été préservée. De plus, la capacité de colorer l’actine à l’aide de phalloïdine marquée par fluorescence a également été préservée.

Le Click-iT test Plus TUNEL contient tous les réactifs nécessaires pour détecter les cellules apoptotiques à partir d’échantillons de tissu ou de cellule. Les réactifs fournis dans ce kit peuvent être utilisés pour tester 50 échantillons et configurés pour tester 150 –échantillons à la fois.