Invitrogen™ CellEvent™ Trousse de cytométrie à flux vert de sénescence

Le kit contient un tampon optimisé et un réactif à base de fluorescéine qui contient deux moitiés de galactosides, ce qui en fait une cible spécifique pour βla -galactosidase. L’activation de βla -galactosidase est couramment utilisée comme biomarqueur pour les cellules sénescentes. Cette enzyme hydrolase réside dans les lysosomes et convertit βles -galactosides en monosaccharides sous un pH acide. Le produit clivé par l’enzyme est retenu à l’intérieur de la cellule grâce à la liaison covalente des protéines intracellulaires et émet un signal fluorogénique ayant des maxima d’absorption/émission de 490/514 nm.

CellEvent Les caractéristiques du kit de cytométrie à flux vert Senescence comprennent :
• Détection fluorescente de l’hydrolyse βde -galactosidase par cytométrie
• en flux Essai
• à cellules fixes Compatibilité

multicolore Lorsque les cellules normales atteignent la fin de leur durée de vie réplicative limitée, communément appelée limite de Hayflick, elles entrent dans une phase sénéscente où elles restent métaboliquement actives sans subir de processus de mort cellulaire. Ces cellules sénécentes adoptent un état phénotypique spécifique qui inclut l’apparition de cellules multi-nucléées, une vacuolisation accrue, l’expression de galactosidase dépendante βdu pH et des changements morphologiques où les cellules s’agrandissent et s’étendent. Par divers mécanismes, ils peuvent jouer un rôle dans la suppression tumorale, la progression tumorale, le vieillissement et la réparation des tissus.

β-La galactosidase réside dans les lysosomes et convertit βles -galactosides en monosaccharides sous un pH acide. L’activité est optimale sous pH lysosomal 4, mais les tests conventionnels mesurent à pH 6. Il a été démontré que l’activité de la -galactosidase βnormalisée est deux fois plus élevée dans les cellules sénescentes que dans les cellules présénécentes, peu importe la valeur de pH utilisée pour les tests.

Traditionnellement, le substrat colorimétrique pour βla -galactosidase, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (x-gal), est depuis longtemps utilisé pour détecter l’activité métabolique dans les cellules in vitro. Lors de l’hydrolyse par β-galactosidase, le x-gal se convertit en un précipité bleu, ce qui n’est pas adapté aux tests cytométriques en flux. Par conséquent, nous avons développé un substrat sensible et fluorescent pour βla -galactosidase qui peut être utilisé dans les essais de cytométrie en flux pour la détection des cellules sénécentes.