Invitrogen™ CellEvent™ Trousse de détection des verts de sénescence

Cette sonde à base de fluorescéine contient deux moitiés de galactosides, ce qui en fait une cible pour βla -galactosidase. L’activation de βla -galactosidase est couramment utilisée comme biomarqueur pour les cellules sénescentes. Cette enzyme hydrolase réside dans les lysosomes et convertit βles -galactosides en monosaccharides sous un pH acide. Le produit clivé enzymatiquement est retenu dans la cellule grâce à la liaison covalente des protéines intracellulaires et émet un signal fluorogène ayant des maximums d’absorption/émission de 490/514 nm.

Les caractéristiques du kit incluent :
• Détection fluorescente fiable et rapide des cellules
• sénescentes Sensibilité supérieure à celle des x-gal •
colorimétriques traditionnelles Le signal fluorescent est bien conservé et détecté à l’aide de filtres
• standards Alexa Fluor™ 488/FITC La sonde de sénescence fluorescente multiplexée—peut être multiplexée

En raison d’une durée de vie réplicative limitée, les cellules normales entrent en arrêt du cycle cellulaire, aussi appelé sénescence cellulaire. Pendant cette phase sénéscente, les cellules restent métaboliquement actives sans subir de mort cellulaire ni de division. Ils adoptent un phénotypique spécifique incluant l’apparition de plusieurs noyaux, une vacuolisation accrue, l’expression de la galactosidase dépendante βdu pH, ainsi que l’élargissement et l’extension morphologiques. La sénescence, par divers mécanismes, peut jouer un rôle dans la suppression tumorale, la progression tumorale, le vieillissement et la réparation des tissus.

L’activation de βla -galactosidase est couramment utilisée comme biomarqueur pour les cellules sénescentes. Cette enzyme hydrolase réside dans les lysosomes et convertit βles -galactosides en monosaccharides sous un pH acide. L’activité est optimale au pH lysosomal 4, mais les tests conventionnels mesurent au pH 6. Il a été démontré que l’activité de la -galactosidase βnormalisée est deux fois plus élevée dans les cellules sénescentes que dans les cellules pré-sénescentes, peu importe la valeur de pH utilisée pour les tests.

Un substrat colorimétrique pour βla -galactosidase, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (x-gal), est depuis longtemps utilisé pour détecter l’activité métabolique dans les cellules in vitro. Cependant, son utilisation est limitée en raison de l’incohérence du signal, de la durée du test et de l’impossibilité de multiplexer.

Nous avons donc développé un substrat fluorescent sensible pour βla -galactosidase qui peut être utilisé pour la détection des cellules sénescentes. La CellEvent™ sonde Senescence Green est un réactif à base de fluorescéine qui contient deux moitiés de galactosides, ce qui en fait une cible spécifique de βla -galactosidase. Le produit clivé par l’enzyme est retenu à l’intérieur de la cellule grâce à la liaison covalente des protéines intracellulaires et émet un signal fluorogénique ayant des maxima d’absorption/émission de 490/514 nm.

Le CellEvent™ kit Senescent Green fournit CellEvent™ une sonde Senescent Green et un tampon optimisé pour la détection des cellules sénescentes dans des échantillons fixes. Cette sonde peut être multiplexée avec d’autres réactifs fluorescents compatibles avec la fixation au paraformaldéhyde.