Invitrogen™ TaqMan™ Kit de cellules d’expression génique vers C_T™

Le TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C_T™ permet d’effectuer une analyse d’expression directement à partir de cellules cultivées sans purification d’ARN. Ce kit fait gagner du temps et offre un flux de travail simple, adapté à quelques échantillons ou facilement intégré dans des applications automatisées à haut débit.

Le TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C_T est :
• Un flux de travail complet—optimisé comprend des réactifs de lyse cellulaire avec élimination de l’ADNG, un mélange enzymatique RT, un tampon et un nouveau TaqMan™ mélange maître•
d’expression génique Préparation rapide—d’échantillons de 7 minutes, incluant le traitement par DNase, à température
• ambiante, des échantillons de lyse facile—dans un tube ou directement dans des
• plaques de culture Robust—réalise une analyse d’expression génique sur 10 –100 000 cellules par échantillon; résultats équivalents à ceux de l’ARN
• purifié Efficientcontient suffisamment de réactifs pour générer 500 résultats de PCR en temps réel à partir de 100 échantillons

de départ. Doté d’une méthode unique pour lyser les cellules cultivées tout en retirant l’ADN génomique et en préservant l’intégrité de l’ARN, le TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C™ T contient des réactifs à transcription inverse (RT) pour la synthèse de l’ADNc et TaqMan™ le Gene Expression Master Mix pour une analyse PCR en temps réel. — TaqMan™ Les ensembles de sondes d’amorce⁄sont vendus séparément.

Préparation simple d’un échantillon de 7 minutes : faisant partie d’un flux de travail
complet. Que vous utilisiez des plaques ou des tubes, le TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C™ T, qui utilise la procédure simple de préparation de l’échantillon de 7 minutes décrite (voir figure), est conçu pour 10 –100 000 cellules⁄cultivées. Les cellules sont lavées dans du PBS et lysées en solution pendant 5 minutes à température ambiante; Le traitement par DNase peut être effectué simultanément. La lyse est terminée à température ambiante par une incubation de 2 minutes avec solution d’arrêt. Les lysats sont maintenant prêts pour la transcription inverse ou le stockage à –20 °C. Comme les échantillons peuvent être traités directement dans des puits de culture (96 ou 384 puits), la manipulation des échantillons et le risque de perte ou d’erreur de transfert sont minimisés, facilitant un traitement rapide et à haut débit. Contrairement aux protocoles d’isolation à ARN en plusieurs étapes à l’ancienne, aucune étape de chauffage, de lavage ou de centrifugation n’est requise. Le kit simplifie grandement un processus laborieux de 30 –à 60 minutes et le réduit à 7 minutes.

Le TaqMan™ flux de travail du kit Gene Expression Cells-to-C™ T permet une évaluation inégalée de l’expression génique avec n’importe lequel >des 700 000 TaqMan™ tests d’expression génique. Ce kit a été largement testé pour sa spécificité avec une large sélection de TaqMan™ tests d’expression génique et présente des performances équivalentes à celles obtenues avec l’ARN purifié (voir figure).

Atteindre une performance et une sensibilité
inégaléesContrairement à certains kits concurrents qui limitent la quantité de lysat dans la réaction RT à 5%, le TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C_T™ peut accueillir 45% du volume total de la réaction RT en tant que lysat cellulaire. De plus, l’ADNc peut représenter jusqu’à 45% du volume de réaction PCR en temps réel. Le grand volume de lysat dans la réaction RT optimisée, ainsi que le grand volume d’ADNc lors de la PCR en temps réel ultérieure utilisant le TaqMan™ Gene Expression Master Mix, conduisent à une sensibilité maximale. Le mélange maître amplifie la cible de façon précise et précise, permettant la détection de petites quantités de cible, telles que les transcriptions exprimées à bas niveaux.

La capacité à détecter des quantités limitées de cibles a été testée en mélangeant un nombre constant de cellules humaines avec différents nombres de cellules de souris. Les mélanges cellulaires ont été préparés à l’aide des TaqMan™ cellules d’expression génique_{vers C}™ T et testés pour identifier un gène spécifique à la souris et à l’humain. Des données comparatives ont été générées de la même manière avec l’ARN purifié par la méthodologie traditionnelle. Les données montrent que l’ARN provenant d’aussi peu que 10 cellules de souris était détectable dans un fond d’ARN provenant de 10 000 cellules humaines (voir figure). La capacité du TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C™ T à détecter des transcrits à faible abondance était équivalente à celle de l’ARN purifié; à faibles niveaux, elle était supérieure.

De plus, la performance du TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C_T™ a été comparée aux kits lysates concurrents et à l’ARN purifié. Les entrées de 100 –à 100 000 cellules⁄de réaction de lyse ont été examinées. La sensibilité du TaqMan™ protocole Cells-to-C_T™ Kit était équivalente à celle obtenue avec l’ARN purifié, et elle dépassait les lysats concurrents (voir figure). De plus, le manque d’inhibition à des entrées cellulaires élevées et la faible variation entre les réplicés techniques démontrent la fiabilité de cette approche pour les études d’expression génique utilisant des cellules en culture.

Performance éprouvée, prouvée ensemble
Tous les composants du TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C_T™ ont été optimisés pour une performance constante et fiable. Cela élimine les incertitudes liées à l’assemblage séparé de kits de préparation d’échantillons, de RT et de PCR en temps réel. Et le TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C_T™ a été validé avec TaqMan™ des tests d’expression génique pour une assurance qualité supplémentaire.

Produit
accessoireLe TaqMan™ kit de contrôle Cells-to-C_T™ a été conçu pour être utilisé avec le TaqMan™ kit Gene Expression Cells-to-C™ T. Ce kit contient un contrôle endogène (ACTB) pour normaliser la variabilité de la charge d’échantillon ainsi qu’un contrôle artificiel XenoRNA™ et un test d’expression génique correspondant TaqMan™ pour surveiller les effets de l’inhibition par PCR.