Invitrogen™ PARIS™ Équipement

Le Invitrogen™ PARIS™ système sert à isoler à la fois l’ARN et la protéine native à partir du même échantillon expérimental. Le kit permet également la séparation des fractions nucléaires et cytoplasmiques avant l’isolement d’ARN et/ou de protéines. La trousse contient suffisamment de réactifs pour 50 purifications allant de 1 à 75 mg de tissu ou de 100 à^{10 cellules} 7 chacune.

• Procédure
• rapide et simple Isoler l’ARN et les protéines nucléaires et cytoplasmiques des cellules
• cultivées Isoler l’ARN et les protéines totaux des cellules ou tissus
• cultivés Aucune extraction de phénol ni précipitation
• d’alcool Réduire le temps, le coût et la variabilité entre les échantillons

expérimentaux indépendants L’isolement d’ARN de haute qualité est la première étape pour diverses analyses d’expression génique. Très souvent, des études complémentaires au niveau des protéines sont également nécessaires. Habituellement, ces analyses sont effectuées à l’aide de différentes aliquotes du même échantillon expérimental. Cependant, lorsqu’on travaille avec des échantillons rares, difficiles à obtenir ou très petits, il est parfois peu pratique d’isoler l’ARN et les protéines natives de manière indépendante. Dans les études impliquant un grand nombre d’échantillons, des réactifs coûteux ou une variabilité inhérente (par exemple, la transfection cellulaire), l’ajout d’échantillons expérimentaux indépendants est non seulement coûteux et chronophage, mais peut aussi mener à des résultats incohérents. Pour résoudre ces problèmes, le système d’isolement des protéines et de l’ARN (PARIS™ système) a été développé. Il permet d’isoler à la fois l’ARN et la protéine à partir du même échantillon expérimental (voir Figure). Grâce au PARIS™ système, l’ARN et la protéine peuvent être isolés simultanément à partir de lysats cellulaires entiers. Alternativement, l’ARN et les protéines peuvent être isolés à partir de fractions nucléaires et cytoplasmiques distinctes. Les tissus ou cellules cultivées sont d’abord homogénéisés dans un tampon de rupture cellulaire glacé afin de préparer un lysat cellulaire total. Puisque l’homogénéisation se fait rapidement sur glace et en présence de détergent, les protéines et l’ARN peuvent être purifiés directement à partir de ce lysat. Pour l’isolation de l’ARN, une partie du lysat cellulaire total est immédiatement mélangée avec un volume égal de solution de lyse/liaison. L’ARN total est ensuite purifié à partir du mélange à l’aide d’un filtre à fibre de verre liant l’ARN. Après trois étapes de lavage rapide, de l’ARN de haute qualité est élué sous forme concentrée. L’ensemble de la procédure peut être complété en moins de 20 minutes. Note : Ce kit n’est pas recommandé pour les tissus ayant des niveaux élevés de ribonucléases, comme le pancréas.

Compatible avec la plupart des applications
en avalL’ARN isolé à partir de fractions totales, nucléaires ou cytoplasmiques grâce à cette PARIS™ procédure peut être utilisé dans diverses applications ultérieures, notamment l’hybridation par blot, la traduction in vitro , la synthèse d’ADNc et la RT-PCR. Un traitement DNase I est recommandé pour l’ARN qui sera utilisé lors des expériences RT-PCR (voir Produits accessoires). Les fractions protéiques peuvent être utilisées directement pour la plupart des applications courantes, y compris les tests fonctionnels, l’immunoprécipitation, le western blotting ou l’électrophorèse sur gel bidimensionnelle (voir Figures).

Produits accessoires :
TURBO™ Réactifs de traitement et d’élimination de la DNase sans™ ADN ou sans ADN™ (Cat. Non.  AM1907 et AM1906, respectivement) sont idéaux pour retirer rapidement des traces d’ADN des échantillons d’ARN total et nucléaire sans extraction de phénol ni précipitation d’alcool. La fraction d’ARN cytoplasmique est pratiquement exempte de contamination par l’ADN.