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Invitrogen™ Kit de transcription mMESSAGE mMACHINE™ T7 ULTRA
Description
Le kit mMACHINE mMESSAGE T7 Ultra combine l’analogue anti-capsule inverse (ARCA) avec une technologie de transcription brevetée à haut rendement pour générer des transcrits d’ARN qui produisent des rendements protéiques plus élevés que d’autres transcrits lors de la traduction.
Les caractéristiques du kit mMESSAGE mMACHINE T7 Ultra incluent :
- Synthétiser plus de protéines à partir d’ARN transcrit in vitro
- Exprimer les transcrits d’ARN plus efficacement, tant in vitro qu’in vivo
- Stabiliser les transcripts in vivo avec les réactifs inclus pour le déroulement poly(A)
L’ARN plaqué par ARCA est plus actif sur le plan translationnel
Une modification de base dans ARCA entraîne son intégration uniquement dans l’orientation fonctionnelle et translatable; L’analogue traditionnel de la capsule peut être intégré dans des orientations fonctionnelles ou non fonctionnelles. En conséquence, l’intégration de l’ARCA dans les réactions de transcription donne des ARN plafonnés qui sont 100% traduisibles. Cela est renforcé par l’inclusion de queues poly(A) dans les transcrits mMESSAGE mMACHINE T7 Ultra. Des expériences comparant des transcrits à queues d’ARCA et d’ARCA/poly(A) aux transcrits analogiques et analogues de cape/poly(A)-queue indiquent des niveaux plus élevés de synthèse protéique avec l’ARN plaqué par ARCA.
Qu’est-ce que l’ARCA?
ARCA est un analogue de condensateur modifié dans lequel le groupe 3' OH (plus proche de m7G) est remplacé par OCH3 (voir schéma). En raison de cette substitution, l’ARN polymérase ne peut initier la transcription qu’avec le groupe hydroxyle restant, forçant ainsi l’incorporation de l’ARCA dans l’orientation vers l’avant. En conséquence, 100% des transcripts synthétisés avec ARCA à l'extrémité 5' sont transférables, ce qui entraîne un fort effet stimulant sur la traduction.
Capacité appropriée de l’ARN transcrit in vitro
Un bon recouvrement de l’ARN favorise l’initiation correcte de la synthèse protéique, ainsi que la stabilité et le traitement in vivo de l’ARNm. L’ARN non condensé est rapidement dégradé par les RNases cellulaires après microinjection ou transfection dans les cellules. L’ARN capsulé est aussi généralement traduit plus efficacement dans les systèmes de traduction in vitro, générant des ARN dont l’analogue de capsule n’est incorporé que dans l’orientation fonctionnelle. Ainsi, la substitution de l’analogue traditionnel de la capsule par l’ARCA entraîne la synthèse d’ARN plafonnés qui sont 100% transférables.
Spécifications
Spécifications
| Contenu et stockage | Le mélange enzymatique T7, le tampon de réaction 10X, la solution ARCA 2XNTP⁄, la solution GTP, le pTRI-Xef, la DNase TURBO, la solution d’arrêt à l’acétate d’ammonium, la solution de précipitation au chlorure de lithium, l’E-PAP, le tampon E-PAP 5X, ATP la solution, MnCl2 et le colorant de charge en formaldéhyde sont tous stockés à –20 °C. L’eau sans nucléase peut être stockée à n’importe quelle température. |
| Type de produit final | ARNm synthétique, ARNm, ARNm plaqué par ARCA |
| Format | Équipement |
| Type d’échantillon | ARNm, ARNm synthétique |
| À utiliser avec (application) | Transcription in vitro, ARNm synthétique, ARNm, transfection, LNPs, GENEart, plasmide d’ADN linéarisé, livraison, produits PCR |
| Nb de réactions | 10 réactions |
| Gamme de produit | Ambion, mMESSAGE mMACHINE |
| Type de produit | T7 Kit de transcription in vitro |
| Quantité | 10 réactions |
| Promoteur | T7 |
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Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.