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Invitrogen™ Kit de transcription mMESSAGE mMACHINE™ T7
Description
Les kits mMESSAGE mMACHINE sont conçus pour la synthèse in vitro de grandes quantités d’ARN plafonné. L'ARN capsulé imite la plupart des ARNm eucaryotes trouvés in vivo, car il possède une structure de calotte de 7-méthyle guanosine à l'extrémité 5'. Les réactions du kit mMESSAGE mMACHINE incluent un analogue de condensation [m7G(5')ppp(5')G] dans une réaction de transcription à très haut rendement. L'analogue de la capsule est incorporé uniquement comme le premier ou le G terminal de 5' du transcrit, car sa structure empêche son incorporation à toute autre position de la molécule d'ARN.
Comment fonctionnent les kits mMESSAGE mMACHINE
Les kits mMESSAGE mMACHINE ont un format de réaction simplifié dans lequel les quatre ribonucléotides et l’analogue de la capsule sont mélangés en une seule solution. Le rapport analogue de la capsule :GTP de cette solution est de 4:1, ce qui est optimal pour maximiser à la fois le rendement ARN et la proportion de transcrits plafonnés. Les kits mMESSAGE mMACHINE sont idéaux pour la synthèse de routine d’ARN capés pour la microinjection d’ovocytes, la traduction in vitro , la transfection et d’autres applications. Les rendements élevés sont obtenus en optimisant les conditions de réaction pour la synthèse de l’ARN en présence de concentrations élevées de nucléotides. De plus, l’ARN synthétisé est protégé contre la dégradation par toute ribonucléase contaminante qui pourrait être présente avec un inhibiteur—de RNase, un composant du mélange enzymatique.
Utilisation des kits mMESSAGE mMACHINE
Dans une réaction de 20 μL durant une incubation de deux heures, la transcription d’ARN plafonné à haut rendement mMESSAGE mMACHINE produira de grandes quantités massives d’ARN capé. Jusqu’à 10 –à 50 fois le rendement obtenu avec les réactions transcriptives in vitro conventionnelles. Le ratio entre l’analogue de la capitalisation et le GTP a été optimisé pour permettre le meilleur compromis entre le rendement (15 –, 35 μg) et la proportion de transcrits plafonnés (80%).
Les kits mMESSAGE mMACHINE contiennent aussi une solution de précipitation LiCl efficace pour séparer les protéines et les nucléotides non incorporés (y compris l’analogue du chapeau libre) de l’ARN capuchonné, permettant une meilleure efficacité de traduction. Les kits mMESSAGE mMACHINE sont uniquement optimisés pour une utilisation avec les polymérases incluses dans le kit. L’utilisation d’une polymérase différente peut entraîner de faibles rendements. Les kits mMESSAGE mMACHINE contiennent tous les tampons et réactifs nécessaires à 25 réactions de transcription. En utilisant le gabarit de contrôle fourni avec les kits (facteur d’allongement Xenopus 1α, pTRI Xef), chaque réaction mMESSAGE mMACHINE produira environ 20 –à 30 μg d’ARN en utilisant T3 ou en polymérase à ARN T7, ou environ 15 –à 25 μg d’ARN polymérase SP6.
Spécifications
Spécifications
| Contenu et stockage | Le mélange enzymatique T7, la solution tampon de réaction 10X 2XNTP/CAP, la solution GTP, le pTRI-Xef, la DNase TURBO, la solution d’arrêt à l’acétate d’ammonium, la solution de précipitation au chlorure de lithium et le tampon de charge gel II sont tous stockés à –20 °C. L’eau sans nucléase peut être stockée à n’importe quelle température. |
| Type de produit final | ARNm synthétique, ARNm |
| Format | Équipement |
| Type d’échantillon | ARNm, ARNm synthétique |
| À utiliser avec (application) | Transcription in vitro, ARNm synthétique, ARNm, transfection, LNPs, GENEart, plasmide d’ADN linéarisé, livraison, produits PCR |
| Nb de réactions | 25 réactions |
| Gamme de produit | Ambion, mMESSAGE mMACHINE |
| Type de produit | T7 Kit de transcription in vitro |
| Quantité | 25 réactions |
| Promoteur | T7 |
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Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.