Invitrogen™ Kit Power SYBR™ Green Cells-to-C_T™

Ambion Power SYBRGreen Cells-to-C_T™ Kit est une méthode rapide, simple et robuste pour passer directement des cellules cultivées aux résultats de la PCR en temps réel. Une technologie révolutionnaire de lyse cellulaire et de stabilisation de l’ARN élimine complètement le processus laborieux et long de purification de l’ARN. Power SYBRGreen_{Cells-to-C T} Kit est alimentépar AmpliTaq Gold™ ADN polymérase, LD, qui offre les plus hauts niveaux de spécificité avec la PCR en temps réel standard.

• Inclut des réactifs optimisés pour fonctionner efficacement, dès la sortie de la boîte
• La technologie simple et efficace Cells-to-C_T permet la préparation de l’échantillon à température ambiante en seulement 7 minutes, y compris le traitement par DNase
• Précision validée, reproductibilité exceptionnelle et sensibilité maximale de 10 à 100 000 cellules par échantillon; des résultats équivalents à ceux de l’ARN purifié

Valeur
extraordinaire Le kit comprend des réactifs pour la préparation d’échantillons intégrés dans un flux de travail complet et optimisé d’expression génique, incluant des réactifs à transcription inverse et un mélange maître PCR haute performance avec SYBRGreen.

Facilité
extraordinaire Le protocole commence par une simple procédure de préparation de l’échantillon de 7 minutes. D’abord, les cellules sont lavées dans du PBS, puis lysées pendant 5 minutes à température ambiante; Le traitement par DNase peut être effectué simultanément. La réaction de lyse est arrêtée, et l’échantillon est alors prêt pour la transcription inverse ou le stockage à -20 °C pendant jusqu’à 5 mois. Parce que les échantillons sont traités directement dans des plaques de culture (96 ou 384 puits), la manipulation des échantillons et le risque de perte ou d’erreur de transfert sont minimisés, ce qui entraîne une meilleure reproductibilité. Après la préparation de l’échantillon, une portion du lysat cellulaire est ajoutée à une réaction RT suivie d’une PCR en temps réel à l’aide du mélange maître inclus.

Performance
extraordinaire Pour démontrer la performance du kit, des expériences de réplication ont été menées soit en utilisant la purification traditionnelle de l’ARN et l’analyse PCR en temps réel, soit le kit Power SYBRGreen Cells-to-C T. Le kit présente des performances équivalentes à celles obtenues en utilisant de l’ARN purifié pour l’analyse de 10 à 100 000 cellules. De plus, la sensibilité, l’efficacité et la plage dynamique se sont révélées supérieures à celles des kits de lysat concurrents. Les échantillons préparés avec le kit ont été testés pour leur compatibilité sur diverses plateformes PCR en temps réel, y compris celles de Applied Biosystems, Roche, et Bio-Rad.

• Méthode PCR : qRT-PCR en 2 étapes
• Pureté/Qualité : LD (faible DAN)
• Colorant de référence passif : ROX (pré-mélangé)
• Polymérase : AmpliTaq Gold™ ADN polymérase

Produit accessoire :
Le kit de contrôle SYBRGreen Cells-to-C_T (Cat. No 4402959) contient un Xeno™ ensemble d’ARN témoin et d’amorce, et il est recommandé de surveiller l’efficacité de la lyse cellulaire et de l’inhibition de l’amplification dans les réactions_Cells-to-C T.