Comment choisir les bons marqueurs de poids moléculaires de protéines
Les marqueurs de poids moléculaires de protéines, aussi connus comme marqueurs de protéines ou standards de protéines, sont utilisés afin d’aider à estimer la taille des protéines séparées par électrophorèse. Ils servent de points de référence puisqu’ils contiennent des mélanges de protéines hautement purifiées avec poids moléculaires et caractéristiques connus.
Les marqueurs de protéines sont chargés sur les gels en même temps que les échantillons et migrent pendant l’électrophorèse à un taux inversement proportionnel à leurs tailles moléculaires. Lorsque la migration est terminée, les protéines apparaîtront sous forme de bandes séparées dans le gel.
Les marqueurs de protéines sont offerts avec diverses tailles de protéines et peuvent être sous forme précolorés ou non colorés. Poursuivez votre lecture afin d’apprendre quels sont les meilleurs pour vos applications.
Que sont les marqueurs de protéines précolorées?
Les protéines à coloration naturelle varient selon la quantité et les endroits disponibles à la liaison du colorant. Les protéines naturellement précolorées peuvent produire des bandes plus diffuses que les protéines recombinantes, surtout lorsqu’elles sont colorées avec plus d’une couleur. Ces bandes diffuses plus larges sont moins distinctes, ce qui les rend moins utiles pour l’estimation de poids moléculaires. Même si certains laboratoires continuent à utiliser les marqueurs de protéines à coloration naturelle, les standards recombinants sont utilisés plus fréquemment.
Les marqueurs de protéines recombinantes sont conçus pour produire des bandes plus étroites, des poids moléculaires espacés de façon plus homogène, et autres caractéristiques spécifiques. Chaque protéine peut être colorée avec une couleur différente pour son identification facile ou marquée de marqueur d’affinité pour la détection lors des transferts westerns.
Dans les transferts westerns, les marqueurs de protéines précolorés peuvent être utilisés afin de :
- Suivre la séparation des protéines lors d’électrophorèse SDS-PAGE (sur gel de polyacrylamide)
- Vérifier l’efficacité de transfert entre le gel et la membrane de PVDF, nylon, ou nitrocellulose
- Calculer la taille approximative de vos protéines en comparant l’image de la membrane avec les marqueurs à l’image produite par détection d’anticorps
Ces marqueurs de protéines recombinantes précolorées comprennent trois bandes de référence à forte intensité : 25, 50, et 75 kD. Ils offrent une identification plus facile des poids moléculaires de protéines et la capacité de suivre la migration pendant l’électrophorèse. (Les marqueurs de protéines non colorées ne contiennent que le colorant bleu de bromophénol au front de migration pour aider à suivre le progrès de cette migration; il n’aide aucunement à évaluer l’efficacité de transfert.)
| No Cat. | Description | Plage de tailles | |
|---|---|---|---|
Marqueurs de protéines précolorées Thermo ScientificMC PageRulerMC | 10 à 180 kDa | ||
Marqueurs de protéines précolorées Thermo Scientific PageRuler Plus | 10 à 250 kDa | ||
Marqueurs de protéines multicolores Thermo ScientificMC SpectraMC, grande plage | 10 à 260 kDa |
Que sont les marqueurs de protéines fluorescentes?
Les marqueurs de protéines fluorescentes sont utilisés lors d’électrophorèse sur gel de polyacrylamide afin d’identifier et quantifier les protéines séparées. Contrairement aux colorants qui absorbent la lumière, les colorants fluorescents émettent de la lumière lorsque le fluorophore du colorant est excité. L’intensité de lumière est proportionnelle à la concentration de protéines.
Les marqueurs précolorés aux colorants qui fluorescent lorsque visionnés à l’aide de lumière de longueurs d’onde particulières sont populaires puisqu’ils sont sensibles, montrent peu d’interférence par bruit de fond, ont une bonne plage dynamique linéaire, et conviennent à l’analyse par spectrométrie de masse.
| No Cat. | Description | Plage de tailles |
|---|---|---|
Marqueurs de protéines précolorées InvitrogenMC iBrightMC | 11 à 250 kDa | |
Standards de protéines InvitrogenMC MagicMarkMC XP pour westerns | 20 à 220 kDa | |
Marqueurs de poids moléculaires de protéines Thermo ScientificMC SuperSignalMC | 20 à 150 kDa |
Que sont les marqueurs de protéines non colorées?
Les marqueurs de protéines non colorées sont utiles lorsque vous devez déterminer de façon précise la taille de votre protéine. Cependant, les protéines peuvent seulement être visualisées après coloration au colorant CoomassieMC ou autre colorant non spécifique des protéines. Les marqueurs de protéines offrent la détermination plus exacte de taille des protéines puisque les colorants des marqueurs précolorés peuvent provoquer une légère distorsion des protéines sur le gel.
Ces marqueurs de protéines incluent les protéines faciles à purifier de poids moléculaires connus. Visualisez-les sur les gels SDS-PAGE par coloration au Coomassie Brilliant Blue R250 ou après transfert western à l’aide du Ponceau S ou un colorant semblable.
| No Cat. | Description | Plage de tailles | ||
|---|---|---|---|---|
Marqueurs de protéines non colorées Thermo Scientific PageRuler, plage de faibles poids moléculaires | 3.4 à 100 kDa | |||
Standards de protéines non colorées InvitrogenMC NativeMarkMC | 20 à 1,200 kDa | |||
Standards de protéines non colorées InvitrogenMC HiMarkMC | 30 à 460 kDa |